The point mutation of cytochrome P-450 lanosterol 14-α demethylase ERG11 gene in Fluconazole-resistant Candida albicans

目的研究国内临床耐氟康唑白念珠菌的吡咯类药物作用靶酶--细胞色素P-450羊毛固醇14-α脱甲基酶的基因ERG11突变. 方法用酶消化和碱裂解法抽提基因组DNA,PCR扩增ERG11基因的读码框片段,将目的片段与PBS载体(Bluscript M13)连接,重组体转入DH5α中,从而测定序列. 结果在15株耐药菌中共发现了12个有义点突变、17个无义点突变和一个菌株的部分移码.12个有义点突变的氨基酸变异是F72L、D81G、D116E、K128T、Y132H、E266D、D294G、S361P、M374V、P386L、H400R和Q474K,突变主要靠近羧基端;而敏感株的氨基酸变异为F72L、K128T和E266D,靠近氨基端.耐药株的D294G、S361P、M374V、P386L、H400R和Q474K氨基酸变异与文献报道不同.结论耐药株和敏感株的点突变不同, D294G、S361P、M374V、P386L、H400R和Q474K变异位点可能与耐药性有关,做整段编码基因的功能表达,有助于明确变异与耐药的关系.