不结球白菜 BrCDF1 的克隆和蛋白亚细胞定位及其与BrFKF1蛋白的互作验证

目的本文旨在揭示 CDF1 基因在不结球白菜（ Brassica rapa ssp. chinensis ）抽薹开花过程中的调控机制，验证其是否与FKF1蛋白发生互作。 方法以‘苏州青’为材料，采用同源克隆方法获得 BrCDF1 基因全长序列，并与其他物种进行氨基酸序列比对；将 BrCDF1 与报告基因 YFP 融合构建亚细胞定位载体pEarlyGate101- BrCDF1-YFP ，采用农杆菌介导的方法将其瞬时表达于本氏烟（ Nicotiana benthamiana ）叶片中；激光共聚焦显微镜观察，利用酵母双杂交和双分子荧光互补技术验证不结球白菜BrCDF1和BrFKF1蛋白是否存在互作。 结果 BrCDF1 基因含有876 bp开放阅读框，编码292个氨基酸。与甘蓝型油菜（ Brassica napus ）、野甘蓝（原变种）（ Brassica oleracea var. oleracea ）、萝卜（ Raphanus sativus ）的氨基酸序列比对结果显示： BrCDF1 在进化过程中的保守程度分别为91.11%、88.25%、84.76%，保守性较高。BrCDF1蛋白定位于细胞核中，BrCDF1和BrFKF1之间存在相互作用。 结论BrCDF1定位于细胞核，并且与BrFKF1互作，在进化过程中保守性较高，并可能参与了不结球白菜的光周期开花途径。