坏死性凋亡和p38 MAPK通路的相互作用介导高糖引起的H9c2 心肌细胞损伤

目的研究坏死性凋亡(necroptosis，Nec)和p38丝裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)通路的相互作用在高糖引起H9c2 心肌细胞损伤中的作用。 方法应用细胞计数盒检测心肌细胞存活率；双氯荧光素染色荧光显微镜照相法检测细胞内活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平；罗丹明 123染色荧光显微镜照相法测定线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential, MMP)；蛋白质免疫印迹法测定RIP3蛋白(反映Nec的指标)和p38MAPK蛋白的表达水平。 结果 高糖(35 mmol·L -1 葡萄糖，HG)作用H9c2心肌细胞24 h可引起明显的细胞损伤，表现为细胞存活率降低，ROS生成及MMP丢失增多；应用100 μmol·L -1 necrostatin-1(Nec-1，Nec特异性抑制剂)和HG共处理心肌细胞24 h或3 μmol·L -1 SB203580(p38MAPK抑制剂)预处理心肌细胞60 min，再予HG作用24 h可减轻高糖引起的上述损伤。此外，HG作用心肌细胞1、3、6、9、12、24、36和48 h均能明显增加RIP3蛋白的表达水平，其中24 h时表达水平增加最明显。应用100 μmol·L -1 Nec-1共处理或3 μmol·L -1 SB203580预处理心肌细胞均能明显地抑制HG对RIP3蛋白表达的上调作用。另一方面，应用100 μmol·L -1 Nec-1共处理心肌细胞能阻断HG对磷酸化(p)-p38MAPK表达的上调作用。 结论 Nec和p38 MAPK通路的相互作用介导高糖引起H9c2 心肌细胞损伤。