大鼠 NeuroD2 基因的克隆、真核表达载体的构建及其在小鼠MSCs细胞中的表达

克隆大鼠 NeuroD2 基因，旨在构建pIRES2-AcGFP1-ND2真核表达载体并检测其在小鼠MSCs中的表达。采用RT-PCR技术克隆大鼠 NeuroD2 基因，分析该蛋白质结构、功能域、细胞定位及与其他物种同源性；构建pIRES2-AcGFP1-ND2表达载体并转染小鼠骨髓间充质干细胞 (MSCs)；采用Real-time PCR、免疫荧光及Western blot技术检测重组质粒在小鼠MSCs中的表达。结果表明，大鼠 NeuroD2 基因CDS区全长1 149 bp，共编码382个氨基酸，属于bHLH家族，二级结构以α-螺旋和无规卷曲为主，空间结构呈现近似“螺旋-环-螺旋 (HLH)”结构，主要分布在细胞核，氨基酸序列与家鼠 (99%)、罗猴 (98%)、人 (97.7%) 同源性较高；Real-time PCR结果表明转染组 NeuroD2 基因表达量显著高于对照组 ( P NeuroD2 蛋白表达量显著高于对照组 ( P NeuroD2 基因并构建了pIRES2-AcGFP1-ND2真核表达载体。