人LIGHT和HSV-TK-EGFP基因共转染的MSCs体外抗肿瘤免疫研究

目的研究与单纯疱疹病毒的糖蛋白D竞争结合单纯疱疹病毒进入介导物（herpes virus entry mediator,HVEM）的淋巴毒素类似物（homologous to lymphotoxins,exhibits inducible expression,and competes with HSV glycoprotein D for HVEM,a receptor expressed by T lymphocytes,LIGHT）基因和单纯疱疹病毒胸苷激酶（herpes simplex virus thymidine kinase,HSV-TK）基因共转染的骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）在体外的抗肿瘤免疫功能。方法将p IRES2-LIGHT基因和HSV-TK-EGFP基因共转染小鼠骨髓间充质干细胞（MSCs/LT组）,以转染空载体（MSCs/mock组）和转染HSV-TK-EGFP基因（MSCs/T组）的骨髓间充质干细胞作对照。流式细胞仪检测LIGHT分子和HSV-TK-EGFP分子在稳定转染的骨髓间充质干细胞上的表达。MTT法和ELISA法检测3组骨髓间充质干细胞在体外对T淋巴细胞的增殖以及其分泌细胞因子白介素-2（interleukin-2,IL-2）、干扰素-γ（interferon-gamma,IFN-γ）和IL-10的影响,并进一步观察3组细胞在体外向乳腺癌细胞株TUBO的迁移情况。结果流式细胞仪检测发现,MSCs/LT能稳定高表达LIGHT分子和HSV-TK-EGFP分子,在加入20μmol/L更昔洛韦诱导3天后99.6%细胞发生凋亡。体外细胞共培养实验表明,与MSCs/mock和MSCs/T组比较,MSCs/LT组骨髓间充质干细胞能显著地促进抗人CD3单抗刺激的T细胞增殖（P〈0.05）;同时能明显促进T细胞分泌IL-2、IFN-γ和IL-10（均P〈0.05）。体外迁移实验结果表明,MSCs/LT、MSCs/mock和MSCs/T组细胞均有向乳腺癌细胞株迁移的特性,3组间差异无统计学意义（P〉0.05）。结论共转染人LIGHT和HSV-TK-EGFP基因的骨髓间充质干细胞稳定高表达LIGHT和HSV-TK-EGFP分子,通过促进T淋巴细胞增殖和IL-2、IFN-γ和IL-10等细胞因子的分泌而发挥抗肿瘤免疫功能。