Régulation enzymatique des canaux chlore des cellules épithéliales : rôle des phosphatases endogènes et implication dans la mucoviscidose

Les cellules canalaires du pancreas secretent le bicarbonate necessaire aux processus digestifs. L'ampc ouvre des canaux anioniques qui controlent ces mecanismes dont le dereglement est associe a la pathologie de la mucoviscidose. Le gene implique code pour un canal chlore, le cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (cftr), dont l'activite est anormale dans la maladie. Dans ce travail j'ai identifie, avec les techniques de patch-clamp, les canaux chlore des cellules canalaires pancreatiques humaines capan-1: un canal de grande conductance, un canal rectifiant sortant et le canal cftr. Le canal cftr est controle par l'ampc et par le peptide vip. La phosphorylation reversible du canal par des proteines kinases a et des phosphatases entraine l'ouverture et la fermeture du canal. La regulation par les phosphatases a ete etudiee sur des cellules pancreatiques canalaires (capan-1 et cfpac) et des cellules exprimant la proteine cftr apres transfection genique (cellules cho et cellules epitheliales pulmonaires humaines). L'utilisation d'anticorps anti-phosphatases et d'inhibiteurs des phosphatases a montre l'existence d'une activite phosphatase associee au canal cftr et impliquee dans le controle de l'ouverture du canal. L'inhibition des phosphatases par ibmx, bromotetramisole, atps, theophylline et vanadate, mais pas par calyculine a, acide okadaique ou leupeptine active le canal cftr normal ainsi que certains mutants (f 508 a 28c, r117h et g551d). Le canal cftr apparait ainsi etroitement controle par des phosphatases associees, ce qui pourrait constituer une voie alternative pour une therapie de la mucoviscidose