猪 FAM213B 基因mRNA和启动子的克隆及序列分析

目的 获得猪 FAM213B 基因完整mRNA和启动子序列，研究猪 FAM213B 基因表达，为探讨母猪妊娠的建立和胚胎发育调控机制奠定基础。落 方法 通过5′RACE和3′RACE技术，获得基因完整mRNA序列，分析不同物种该基因氨基酸序列相似性；通过PCR克隆启动子区，并通过双荧光素酶报告基因载体系统转染猪子宫内膜细胞，研究其转录活性。 结果 猪 FAM213B 基因mRNA全长808 bp，其中5′UTR、CDS区和3′UTR长度分别为67、609(含终止密码子)和132 bp(不含poly A序列)，在17~106位氨基酸之间存在硫氧还蛋白折叠结构域；与猪 FAM213B 基因其他2个潜在转录本相比，三者都包含硫氧还蛋白折叠结构域，但蛋白三级结构存在较大差异；猪 FAM213B 氨基酸序列与山羊、牛和绵羊高度相似，相似性分别为94.03%、93.03%和91.54%。克隆获得2 261 bp(-2 231/+30) 的基因启动子序列，将其连接至双荧光素酶报告基因载体，转染猪子宫内膜细胞，发现获得的启动子片段能够启动下游报告基因的转录，在启动子区存在潜在的典型NFκB等转录因子结合位点。 结论 本研究获得猪 FAM213B 基因转录本长度为808 bp，其蛋白存在硫氧还蛋白折叠功能结构域，其启动子序列(-2 231/+30) 在猪子宫内膜细胞中具有较强的转录活性。