热带假丝酵母 ctpxa1 基因缺失菌的构建及对长链二元酸积累的影响

Pxa1p为酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae 过氧化物酶体上的膜蛋白，与Pxa2p组成二聚体，参与转运长链脂肪酸进入过氧化物酶体过程。热带假丝酵母能够发酵烷烃和脂肪酸生产长链二元酸，而过氧化物酶体中发生的β-氧化会消耗产生的长链二元酸造成产率降低。本研究以热带假丝酵母 Candida tropicalis 1798为宿主菌，通过基于PCR片段的同源单交换法，快速构建 ctpxa1 基因敲除菌株 C. tropicalis 1798- pxa1 。利用半定量RT-PCR技术，检测 ct pxa1 基因在 C. tropicalis 1798、 C. tropicalis 1798- pxa1 的表达量，灰度值比值为2.03，表明 ct pxa1 在 C. tropicalis 1798- pxa1 中的表达被弱化。经144 h发酵， C. tropicalis 1798- pxa1 比 C. tropicalis 1798的十二碳二元酸产量明显提升，其产出浓度为10.3 g/L，比野生型菌株 C. tropicalis 1798提高了94.3%。