Aislamiento e identificación de células madre adultas a partir de la grasa infrapatelar de Hoffa / Isolation and identification of stem cells derived of infrapatelar fat pad

Resumen Introduccion: La grasa infrapatelar de Hoffa es una inclusion infraarticular presente en la rodilla y existen evidencias que celulas multipotentes estan presentes en tejido adiposo del humano adulto. Objetivo: El proposito de este trabajo es aislar e identificar celulas mesenquimales a partir de muestras de la grasa de Hoffa tomadas de pacientes a los que se les practico cirugia de rodilla que expongan este tejido. Metodologia: Una vez obtenido el consentimiento informado de un total de 12 pacientes, se obtuvo la muestra de tejido graso. La grasa fue disgregada incubandola en colagenasa en PBS a 37oC y con agitacion, luego se inactivo con suero fetal bovino, se separaron mediante centrifugacion los adipocitos maduros de las celulas multipotentes y se obtuvieron las muestras para sembrar en medio Mesencult. Una porcion de muestra fue utilizada para identificacion mediante citometria de flujo y otra parte para ser coloreada con azul de metileno. Resultados y Discusion: Tanto en las tinciones con azul de metileno como en los cultivos celulares se han apreciado celulas con la morfologia propia de una celula mesenquimal en forma de estrella y que fueron corroborados mediante citometria de flujo para los marcadores CD13, CD29, CD59 y CD105; igualmente hemos podido observar la efectividad del tratamiento enzimatico. Conclusiones: En la actualidad nos encontramos consolidando los cultivos primarios para posteriormente diferenciarlos en lineas celulares especificas que puedan ser utilizadas en estudios de patologias, tales como obesidad, diabetes y trastornos articulares. Palabras clave : Celulas madre, grasa de Hoffa, celulas mandis, cultivo celular. Abstract Introduction: The infrapatellar fat pad (sometimes know Hoffa´s pad) is a soft tissue that lies beneath the patella (kneecap) separating it from the femoral condyle. There is evidence suggesting the presence of stem cells on adipose tissue in the adult human. Objective: The purpose of this work is to isolate and identify grown stem cells from Hoffa´s fat samples obtained from patients undergoing surgeries exposing this tissue. Materials and Methods: After obtaining informed consent, the biopsy of Hoffa´s fat pad was obtained. The samples were incubated with collagenase and PBS a 37 oC and agitated, then it was inactivated with fetal bovine serum and centrifuged, washed twice with PBS, the pellet was resuspended and one part was cultivated on Mesencult medium the other part was used for flow cytometry and stained with methylene blue for morphologic analysis. Also before and after the enzyme digestion, the samples were added to 10% formaldehyde to evaluate the collagenase treatment. Results and analysis: The results show the effectiveness of the enzymatic treatment, the architecture of the adipose tissue was lost. The star shape stem cells morphology was appreciated with methylene blue in the cultures, it was corroborated by flow cytometry with CD13, CD29, CD59 and CD 105 markers. Conclusions: Primary cultures are consolidating, the next aim will be to obtain differentiated specific cell types that can be use in the study of obesity, diabetes and articular illnesses. Keywords: Stem cells, infrapatellar fat pad, mandis cells, culture cellular