Développement d'outils enzymatiques pour la caractérisation du fucoïdane extrait de l'algue Ascophyllum nodosum : purification et propriétés de nouvelles hydrolases isolées du mollusque marin Pecten maximus

Le fucoidane bio-actif, constitue de L-fucose sulfate, extrait d'algues brunes et en particulier de l'algue Ascophyllum nodosum. Depuis 1987, ce polysaccharide est etudie par le Laboratoire de Recherches sur les Macromolecules (LRM, CNRS, FRE 2314) et le Laboratoire de Biochimie et Molecules Marines (VP/BM) du centre IFREMER de Nantes, (URM 2, IFREMER-CNRS-Universite Paris 13). A l'instar de la plupart des polysaccharides biologiquement actifs, jamais ses propriees n'ont ete exploitees a des fins therapeutiques. Ceci est lie en partie au manque de connaissances de sa structure fine et des mecanismes moleculaires qui gouvernent ses activites. L'objectif de ce travail etait de mettre en oeuvre une approche enzymatique permettant d'obtenir des informations sur la structure du fucoidane d'Ascophyllum nodosum. Au cours de cette etude nous avons montre qu'un extrait enzymatique obtenu a partir des glandes digestives de la coquille Saint-Jacques (Pecten maximus) etait capable d'hydrolyser efficacement le fucoidane d'Ascophyllum nodosum. Trois activites enzymatiques responsables de cette hydrolyse, une activite exo-glycosidase (α-L-fucosidase), une sulfatase et une endoglycosidase (fucoidanase) ont ete identifiees. Nous avons purifie une α-L-fucosidase par chromatographie d'affinite (6-N-acetylamino-deoxymannojirimycine). De meme nous avons isole une activite sulfatase regio-selective du L-fucose sulfate en position 2 (L-fucose 2-sulfoesterase). Aucun enzyme de ce type n'a jamais ete decrite dans la litterature. Ces enzymes ont permis d'entreprendre la caracterisation structurale de fucoidane. Nos travaux ont montre que le fucoidane d'Ascophyllum nodosum etait constitue de L-fucose majoritairement sulfate en position 2 et lie par des liaisons osidiques α1→3 et α1→4. Ces caracteristiques font du fucoidane d'Ascophyllum nodosum, le plus complexes de cette famille. Les enzymes purifiees seront utiles dans la comprehension de ses proprietes biologiques.