logo
    Abstract:
    Abstract In our study, we discovered the presence of tunnelling nanotubes (TNTs) in three oral carcinoma cell lines, suggesting an alternative form of cellular communication. These TNTs act as channels for the movement of membrane-bound vesicles and microRNAs (miRNAs), indicating their potential influence on cancer progression and intercellular interactions. Our findings demonstrate that TNTs can form spontaneously under normal growth conditions, not just as a stress response. Through time-lapse microscopy, we captured the rapid and dynamic process of TNT formation, typically occurring within 20-40 minutes, via two primary methods: actin-driven cellular extensions and sustained connectivity during cell division. We also successfully visualised the active transfer of miRNA mimics through these TNTs. Notably, we detected the presence of AGO2 protein within the TNTs, implying its involvement in the delivery of miRNAs to recipient cells. Our study adds to the overall understanding of TNTs in the context of oral cancer biology and suggests a broader role for these structures in molecular transport.
    目的将开始由微数组技术在人的胰腺的癌症房间线分析 miRNAs 表示侧面的差别。743 根探针全部的方法 A 根据人,老鼠,和老鼠的已知的 miRNAs 序列被设计。miRNAs 微数组被生产,它的可靠被验证。全部的 RNA 被提取, miRNAs 与胰腺的癌症房间衬里的人(SW1990, Capan-2, BxPC-3, Aspc-1,和 Panc1 ) 和不朽的人被分开胰腺的管上皮的房间线 H6C7。他们用 T4 RNA ligase 被标记,当时是有微数组的 hybridized。通过数组扫描和分析,在胰腺的癌症的 miRNAs 表达式侧面被获得。结果被北弄污和 RT-PCR 验证。与胰腺的癌症有关的 63 miRNAs 全部的结果 A 被发现是在 5 根胰腺的癌症房间线表示的差别,包括 25 下面调整并且 38 起来调整的 miRNAs。mir-21 和 let-7 的表情也被证实。结果建议了侧面能在胰腺的癌症房间被发现的那 miRNAs 表情的结论。
    Citations (0)
    Σημαντικός ρόλος στη διαδικασία της ογκογένεσης και αγγειογένεσης αποδίδεται τα τελευταία χρόνια στα microRNAs. Τα microRNA είναι μικρά μόρια RNA που ρυθμίζουν αρνητικά την έκφραση γονιδίων σε μετά-μεταγραφικό επίπεδο. Αρχικά, επικρατούσε η άποψη ότι μόνο το 5’ σκέλος των microRNAs ήταν λειτουργικό, ενώ το 3’ αποικοδομούνταν. Ωστόσο, σε τελευταίες μελέτες φαίνεται ότι ο λιγότερο άφθονος κλώνος (miRNA* ή miR-3p) είναι επίσης λειτουργικός. Όντας σταθερά στην κυκλοφορία και ανθεκτικά σε βιοχημικές αλλαγές, τα microRNAs αποτελούν ελπιδοφόρους βιοδείκτες. Πληθώρα μελετών έχουν ταυτοποιήσει την έκφραση συγκεκριμένων microRNA με προγνωστική και προβλεπτική ικανότητα. Εκτιμάται ότι τέτοιου είδους μικρά μόρια RNA μπορούν να αξιοποιηθούν για τον καλύτερο ιατρικό χειρισμό ασθενών με καρκίνο. Στην παρούσα μελέτη διερευνήσαμε το ρόλο των microRNA που σχετίζονται τόσο με την αγγειογένεση όσο και με την ογκογένεση σε συμπαγείς όγκους, τον καρκίνο του μαστού, του στομάχου και του παχέος εντέρου. Επιπλέον μελετήσαμε την πιθανή έκφραση και των δύο κλώνων του ίδιου microRNA. Στο πλαίσιο ελέγχου της επίδρασης της χειρουργικής πράξης μελετήσαμε την κινητική τριών microRNA (miR- 195, miR-21, miR-155) στο αίμα ασθενών με καρκίνο του μαστού, τεσσάρων microRNA (miR-155-5p, miR-155-3p, miR-21-5p, miR-21-3p, let-7a, miR-200c) στο αίμα ασθενών με καρκίνο του στομάχου και τεσσάρων microRNA (miR-155-5p, miR-155-3p, miR-135a-5p, miR-135a-3p, let-7a, miR-200c) στο αίμα ασθενών με καρκίνο του παχέος εντέρου προ-εγχειρητικά και μετεγχειρητικά (3η, 7η και 30η μετεγχειρητική ημέρα). Επιπλέον μελετήσαμε την έκφραση μιας ομάδας microRNAs που έχουν συσχετισθεί με την απόπτωση σε βλάστες που απομονώθηκαν από ασθενείς με οξεία μυελογενή λευχαιμία (ΟΜΛ) και την πρόβλεψη των γονιδίων – στόχων τους. Στον καρκίνο του μαστού επίμονα αυξημένα μετεγχειρητικά επίπεδα του miR-195 ανιχνεύθηκαν μόνο σε ασθενείς που ανέπτυξαν πρώιμη υποτροπή του όγκου και τα επίπεδα του miR-155 έτειναν να αυξάνονται τρεις ημέρες μετά την επέμβαση. Στον καρκίνο του στομάχου για πρώτη φορά διαπιστώθηκε ότι και οι δύο κλώνοι του miR- 21 και του miR-155 εκφράζονται σε ασθενείς με καρκίνο του στομάχου, αν και ακολουθούν διαφορετικό προφίλ έκφρασης. Επίσης βρέθηκε ότι τα υψηλά επίπεδα έκφρασης προεγχειρητικά του miR-200c παρουσίαζουν περισσότερες πιθανότητες για εμφανιση μετάστασης. Ωστόσο, σε αντίθεση με τα αποτελέσματα του καρκίνου του στομάχου, η έκφραση του miR-155 -3p φτάνει σε υψηλότερα επίπεδα σε σχέση με το miR-155-5p στον καρκίνο του εντέρου. H ως άνω διαπίστωση αποτελεί για πρώτη φορά την ένδειξη ότι το miR-155-3p πιθανόν να έχει λειτουργικό ρόλο στον καρκίνο του εντέρου. Στη μελέτη των microRNA που εμπλέκονται στην απόπτωση στην Οξεία Μυελογενή Λευχαιμία βρήκαμε ότι μεταξύ των προβλεπόμενων γονιδίων- στόχων των miRNAs που βρέθηκαν να υπερεκφράζονται είναι γονίδια που κωδικοποιούν προαποπτωτικές zinc finger πρωτεΐνες και Solute Carrier μεμβρανικούς υποδοχείς, ενώ μεταξύ των προβλεπόμενων γονιδίων-στόχων των miRNAs που βρέθηκαν να υποεκφράζονται είναι γονίδια που εμπλέκονται στην αρχιτεκτονική της χρωματίνης, υποδηλώνοντας ότι οι διαταραχές επιγενετικών τροποποιητών στην ΟΜΛ μπορεί να οφείλονται σε διαταραγμένη έκφραση miRNAs. Συνολικά, τα παραπάνω δεδομένα υπογραμμίζουν τον σημαντικό ρόλο των miRNAs στην ογκογένεση και την αγγειογένεση αλλά την κλινική τους σημασία ως δυνητικούς βιοδείκτες πρόγνωσης σε νεοπλασίες.
    miR-155
    Citations (0)
    Consistent cell culture performance is a prerequisite to ensure product quality consistency and achieve productivity goals for the manufacture of recombinant protein therapeutics, including monoclonal antibodies. Here a peculiar observation is reported where high levels of intracellular BiP in seed train cultures are consistently predictive of poor cell culture performance in the subsequent inoculum and production cultures for a monoclonal antibody produced in CHO cells. This investigation suggests that in this cell line the high intracellular BiP levels in the seed train are triggered by a slightly lower culture pH, which interferes with proper antibody folding and secretion. While the seed train culture does not display any obvious signs of the problem at slightly lower culture pH, inoculum trains, and production cultures sourced from these low pH seed trains display significantly lower cell growth and cell size. High intracellular BiP levels may interfere with UPR signaling, thereby hampering a proper and timely UPR response in the production media. Studies of other problematic cell lines have shown a similar correlation between intracellular BiP accumulation and poor production performance. The authors believe intracellular BiP levels in seed train should hence be low in order to increase the success rate in production.
    Citations (6)
    Intracellular pH of the turtle bladder was measured with fluorescent probe 6-carboxyfluorescein (6-CF) diacetate. In isolated cells this probe provides reliable, reproducible and fast measurements of intracellular pH. The probe was mainly located in the cytosol and thus the values of intracellular pH mainly reflect cytosolic pH. The values of intracellular pH obtained with 6-CF were very similar to those measured with 14C-methylamine and 'null point' technique. The 6-CF technique was capable of detecting small changes in intracellular pH induced by acetazolamide. The intracellular pH of the mitochondrial-rich and granular cell fraction was not different. In addition to assessing intracellular pH of isolated cells, it was possible to monitor the intracellular pH of whole bladders continuously with 6-CF. Addition of CO2 to serosal solution decreased intracellular pH while perfusion with NH3 increased intracellular pH. Thus, 6-CF provides reliable and accurate measurements of intracellular pH in isolated cells and in whole bladders. This technique is capable of detecting rapid changes in intracellular pH and provides continuous monitoring of intracellular pH and thus should allow correlation of changes in urinary acidification with intracellular H+ concentration.
    Intracellular pH
    Intracellular Fluid
    Citations (1)
    MicroRNAs are well-known strong RNA regulators modulating whole functional units in complex signaling networks. Regarding clinical application, they have potential as biomarkers for prognosis, diagnosis, and therapy. In this review, we focus on two microRNAs centrally involved in lung cancer progression. MicroRNA-21 promotes and microRNA-34 inhibits cancer progression. We elucidate here involved pathways and imbed these antagonistic microRNAs in a network of interactions, stressing their cancer microRNA biology, followed by experimental and bioinformatics analysis of such microRNAs and their targets. This background is then illuminated from a clinical perspective on microRNA-21 and microRNA-34 as general examples for the complex microRNA biology in lung cancer and its diagnostic value. Moreover, we discuss the immense potential that microRNAs such as microRNA-21 and microRNA-34 imply by their broad regulatory effects. These should be explored for novel therapeutic strategies in the clinic.
    Citations (20)
    1. The possible role of pH changes in mediating light adaptation in Limulus ventral photoreceptor cells was studied by intracellular injection of zwitterionic pH buffers. The intracellular concentration of buffer was estimated by inclusion of a radioactive marker in the injection solution. 2. The light‐induced increase of intracellular Ca2+ concentration was monitored by intracellular aequorin. The light‐induced increase of Ca2+ concentration was not markedly altered by injection of pH buffer to an intracellular concentration of about 200 mM. 3. The progressive decrease in responsiveness during intracellular ionophoretic injection of Ca2+ was not markedly altered by injection of pH buffer to an intracellular concentration of about 200 mM. 4. Photoreceptors of both Limulus and Balanus were impaled with two micropipettes and voltage clamped. Membrane current induced by a prolonged steady illumination declined from an early transient to a plateau. This delayed decline of current indicates a light‐induced reduction of sensitivity (i.e. light adaptation). The wave forms were similar before and after injection of pH buffer to an intracellular concentration of about 200 mM. 5. We conclude that it is unlikely that a light‐induced change of cytosolic pH mediates light adaptation in Limulus (and Balanus) photoreceptors.
    Intracellular pH
    Aequorin