MiR-1-3p Suppresses Colorectal Cancer Cell Proliferation and Metastasis by Inhibiting YWHAZ-Mediated Epithelial–Mesenchymal Transition
26
Citation
35
Reference
10
Related Paper
Citation Trend
Abstract:
Colorectal cancer (CRC) is regarded as one of the most common malignancies in the world. MiR-1-3p was reported to be a tumor suppressor in CRC. However, the mechanisms have not been fully elucidated.To identify CRC-associated miRNA, microarray data set GSE30454 was downloaded from the Gene Expression Omnibus database (GEO), and miR-1-3p was screened out as a candidate. The expression of miR-1-3p was detected using quantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR) in CRC cell lines and tissues. CCK-8 assay and transwell invasion assay were performed to determine CRC cell line proliferation and invasion, respectively. The levels of YWHAZ and EMT-associated proteins were detected using western blotting.Bioinformatic analysis showed that miR-1-3p was downregulated in CRC tissues, which is verified by our experimental validation. The overexpression of miR-1-3p significantly suppressed CRC cell proliferation and invasion. Further studies showed that YWHAZ was a direct target of miR-1-3p and mediated epithelial-mesenchymal transition (EMT) modulated by miR-1-3p.Our results demonstrated that miR-1-3p suppresses colorectal cancer cell proliferation and metastasis through regulating YWHAZ-mediated EMT, which may support a novel therapeutic strategy for CRC patients.Blotting is a common technique widely used for molecular analysis in life sciences. The Western blot, in particular, is a process of transferring protein samples from a polyacrylamide gel to a blotting membrane and detecting the levels of specific proteins through reactions with primary and secondary antibodies. The state-of-the-art of Western blotting usually generates one blotting membrane per gel. However, multiple copies of blots are useful in many applications. Two blotting copies from a single protein gel, for instance, can be used for identifying a total amount of proteins of interest as well as its specific subpopulation level such as a phosphorylated isoform. To achieve this multi-blotting operation from a single gel, we modified a blotting procedure and developed a novel blotting device. The device consisted of a multi-anode plate and a microcontroller. It was designed to generate a well-controlled electrophoretic voltage profile, which allowed a quasi-uniform transfer of proteins of any size. The prototype device was built and its operation procedure was described. The experimental results clearly supported the notion that the described device was able to achieve multiple blotting from a single gel and reduce time and cost for protein analysis.
Southern blot
Cite
Citations (2)
Protein blotting was initially introduced in the late 1970s to identify protein antigens that bound to spectfic antibodies (,) In this procedure, a complex protein fraction was separated by electrophoresis and the proteins transferred and bound to a membrane, which was then probed with a radiolabeled antibody This concept and procedure were based on blotting and hybridization methods developed for DNA by Southern () (and logically called Southern blotting), which was subsequently modified for RNA () (less logtcally called Northern blotting by some authors). It is, therefore, not surprising that the protem/antibody procedure was called Western blotting (), and that Southwestern (protein/DNA) and Far Western (or West Western) (protem/protem) procedures have since been developed In addition, it is possible to apply proteins to the membrane in solution (dot-blotting), or to transfer them directly from tissues (squash blots and tissue prints), whereas the development of microscale protein sequencing and ammo-acid analysts has allowed the use of blotting to purify and characterize individual components of highly complex mixtures
Southern blot
Northern blot
Cite
Citations (3)
Human disease
Cite
Citations (2)
目的将开始由微数组技术在人的胰腺的癌症房间线分析 miRNAs 表示侧面的差别。743 根探针全部的方法 A 根据人，老鼠，和老鼠的已知的 miRNAs 序列被设计。miRNAs 微数组被生产，它的可靠被验证。全部的 RNA 被提取， miRNAs 与胰腺的癌症房间衬里的人(SW1990， Capan-2， BxPC-3， Aspc-1，和 Panc1 ) 和不朽的人被分开胰腺的管上皮的房间线 H6C7。他们用 T4 RNA ligase 被标记，当时是有微数组的 hybridized。通过数组扫描和分析，在胰腺的癌症的 miRNAs 表达式侧面被获得。结果被北弄污和 RT-PCR 验证。与胰腺的癌症有关的 63 miRNAs 全部的结果 A 被发现是在 5 根胰腺的癌症房间线表示的差别，包括 25 下面调整并且 38 起来调整的 miRNAs。mir-21 和 let-7 的表情也被证实。结果建议了侧面能在胰腺的癌症房间被发现的那 miRNAs 表情的结论。
Cite
Citations (0)
Σημαντικός ρόλος στη διαδικασία της ογκογένεσης και αγγειογένεσης αποδίδεται τα τελευταία χρόνια στα microRNAs. Τα microRNA είναι μικρά μόρια RNA που ρυθμίζουν αρνητικά την έκφραση γονιδίων σε μετά-μεταγραφικό επίπεδο. Αρχικά, επικρατούσε η άποψη ότι μόνο το 5’ σκέλος των microRNAs ήταν λειτουργικό, ενώ το 3’ αποικοδομούνταν. Ωστόσο, σε τελευταίες μελέτες φαίνεται ότι ο λιγότερο άφθονος κλώνος (miRNA* ή miR-3p) είναι επίσης λειτουργικός. Όντας σταθερά στην κυκλοφορία και ανθεκτικά σε βιοχημικές αλλαγές, τα microRNAs αποτελούν ελπιδοφόρους βιοδείκτες. Πληθώρα μελετών έχουν ταυτοποιήσει την έκφραση συγκεκριμένων microRNA με προγνωστική και προβλεπτική ικανότητα. Εκτιμάται ότι τέτοιου είδους μικρά μόρια RNA μπορούν να αξιοποιηθούν για τον καλύτερο ιατρικό χειρισμό ασθενών με καρκίνο. Στην παρούσα μελέτη διερευνήσαμε το ρόλο των microRNA που σχετίζονται τόσο με την αγγειογένεση όσο και με την ογκογένεση σε συμπαγείς όγκους, τον καρκίνο του μαστού, του στομάχου και του παχέος εντέρου. Επιπλέον μελετήσαμε την πιθανή έκφραση και των δύο κλώνων του ίδιου microRNA. Στο πλαίσιο ελέγχου της επίδρασης της χειρουργικής πράξης μελετήσαμε την κινητική τριών microRNA (miR- 195, miR-21, miR-155) στο αίμα ασθενών με καρκίνο του μαστού, τεσσάρων microRNA (miR-155-5p, miR-155-3p, miR-21-5p, miR-21-3p, let-7a, miR-200c) στο αίμα ασθενών με καρκίνο του στομάχου και τεσσάρων microRNA (miR-155-5p, miR-155-3p, miR-135a-5p, miR-135a-3p, let-7a, miR-200c) στο αίμα ασθενών με καρκίνο του παχέος εντέρου προ-εγχειρητικά και μετεγχειρητικά (3η, 7η και 30η μετεγχειρητική ημέρα). Επιπλέον μελετήσαμε την έκφραση μιας ομάδας microRNAs που έχουν συσχετισθεί με την απόπτωση σε βλάστες που απομονώθηκαν από ασθενείς με οξεία μυελογενή λευχαιμία (ΟΜΛ) και την πρόβλεψη των γονιδίων – στόχων τους. Στον καρκίνο του μαστού επίμονα αυξημένα μετεγχειρητικά επίπεδα του miR-195 ανιχνεύθηκαν μόνο σε ασθενείς που ανέπτυξαν πρώιμη υποτροπή του όγκου και τα επίπεδα του miR-155 έτειναν να αυξάνονται τρεις ημέρες μετά την επέμβαση. Στον καρκίνο του στομάχου για πρώτη φορά διαπιστώθηκε ότι και οι δύο κλώνοι του miR- 21 και του miR-155 εκφράζονται σε ασθενείς με καρκίνο του στομάχου, αν και ακολουθούν διαφορετικό προφίλ έκφρασης. Επίσης βρέθηκε ότι τα υψηλά επίπεδα έκφρασης προεγχειρητικά του miR-200c παρουσίαζουν περισσότερες πιθανότητες για εμφανιση μετάστασης. Ωστόσο, σε αντίθεση με τα αποτελέσματα του καρκίνου του στομάχου, η έκφραση του miR-155 -3p φτάνει σε υψηλότερα επίπεδα σε σχέση με το miR-155-5p στον καρκίνο του εντέρου. H ως άνω διαπίστωση αποτελεί για πρώτη φορά την ένδειξη ότι το miR-155-3p πιθανόν να έχει λειτουργικό ρόλο στον καρκίνο του εντέρου. Στη μελέτη των microRNA που εμπλέκονται στην απόπτωση στην Οξεία Μυελογενή Λευχαιμία βρήκαμε ότι μεταξύ των προβλεπόμενων γονιδίων- στόχων των miRNAs που βρέθηκαν να υπερεκφράζονται είναι γονίδια που κωδικοποιούν προαποπτωτικές zinc finger πρωτεΐνες και Solute Carrier μεμβρανικούς υποδοχείς, ενώ μεταξύ των προβλεπόμενων γονιδίων-στόχων των miRNAs που βρέθηκαν να υποεκφράζονται είναι γονίδια που εμπλέκονται στην αρχιτεκτονική της χρωματίνης, υποδηλώνοντας ότι οι διαταραχές επιγενετικών τροποποιητών στην ΟΜΛ μπορεί να οφείλονται σε διαταραγμένη έκφραση miRNAs. Συνολικά, τα παραπάνω δεδομένα υπογραμμίζουν τον σημαντικό ρόλο των miRNAs στην ογκογένεση και την αγγειογένεση αλλά την κλινική τους σημασία ως δυνητικούς βιοδείκτες πρόγνωσης σε νεοπλασίες.
miR-155
Cite
Citations (0)
Southern blot
Northern blot
Cite
Citations (5)
Fluorescent detection in Western blotting offers high sensitivity, broad dynamic range and stability of signals. This makes it highly suitable for quantitative Western blotting. Here we show how fluorescent Western blotting can be used for simultaneously detection of up to three different proteins on the same blot at the same time and for detection of proteins of the same molecular weight without stripping and reprobing. We also demonstrate how fluorescent Western blotting with 3 layer probing can be used to increase sensitivity and thereby enables detection of very low abundant proteins. Finally we demonstrate that it is possible to compare the total protein amount to the target protein by using Deep Purple™ protein staining prior to ECL™ Plex™ Western blotting.
Protein detection
Cite
Citations (0)
MicroRNAs are well-known strong RNA regulators modulating whole functional units in complex signaling networks. Regarding clinical application, they have potential as biomarkers for prognosis, diagnosis, and therapy. In this review, we focus on two microRNAs centrally involved in lung cancer progression. MicroRNA-21 promotes and microRNA-34 inhibits cancer progression. We elucidate here involved pathways and imbed these antagonistic microRNAs in a network of interactions, stressing their cancer microRNA biology, followed by experimental and bioinformatics analysis of such microRNAs and their targets. This background is then illuminated from a clinical perspective on microRNA-21 and microRNA-34 as general examples for the complex microRNA biology in lung cancer and its diagnostic value. Moreover, we discuss the immense potential that microRNAs such as microRNA-21 and microRNA-34 imply by their broad regulatory effects. These should be explored for novel therapeutic strategies in the clinic.
Cite
Citations (20)
Western blotting (immunoblotting) is a powerful and commonly used technique that is capable of detecting or semiquantifying an individual protein from complex mixtures of proteins extracted from cells or tissues. The history surrounding the origin of western blotting, the theory behind the western blotting technique, a comprehensive protocol and the uses of western blotting are presented. Lesser known and significant problems in the western blotting field and troubleshooting of common problems are highlighted and discussed. This work is a comprehensive primer and guide for new western blotting researchers and those interested in a better understanding of the technique or getting better results.
Southern blot
Cite
Citations (42)
Western blotting and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) are the two most useful and sensitive methods to measure the ng/ml to pg/ml ordered materials in the solution, such as serum, urin e and tissue/cultured cell supernat ant, and they are especially widely used in protein detection. Western bl otting and ELISA have widely application in scientific researches, industry and medical prac tice. Besides the Western blotting, Northern blotting and Southern blotting are also useful in the biochemical application. This article describes the principle techniques for Western blotting and ELISA procedure. (Researcher. 2009;1(2):67-86) . (ISSN: 1553-9865).
Cite
Citations (19)