Cultivation, identification and differentiation of skin-derived precursors in vitro

目的 探讨皮肤源祖细胞的体外培养、鉴定及定向诱导成脂、成骨的方法,为组织工程提供较理想的种子细胞.方法 出生1～3 d的SD大鼠幼鼠皮肤,以含表皮生长因子和成纤维细胞生长因子的培养基进行培养.观察细胞生长情况,描绘生长曲线;免疫荧光鉴定细胞表达Nestin和Fibronectin情况;将第3代细胞,分别用成脂和成骨诱导液培养14 d,以油红O染色、茜素红染色和免疫荧光检测皮肤源祖细胞诱导成脂、成骨情况.结果 细胞呈悬浮生长,迅速增殖形成克隆球团;细胞免疫荧光表达Nestin和Fibronectin;成脂诱导14 d后,细胞内大量致密颗粒形成,油红O染色可见红色脂滴;成骨诱导14 d后,茜素红染色可见暗红色钙盐沉积,骨桥蛋白表达阳性显示成骨细胞形成.结论 皮肤源祖细胞具有干细胞的特性,能分化为成骨细胞和脂肪细胞。