Protocol for rapid fetal sex determination in chorionic villus through polimerase chain reaction

A determinacao do sexo fetal e essencial para o diagnostico pre-natal de doencas relacionadas ao sexo como hiperplasia adrenal congenita e sindrome de insensibilidade androgenica. As tecnicas de biologia molecular identificam a presenca do cromossomo Y atraves de metodologia mais facil e rapida do que a tecnica citogenetica convencional. Utilizamos DNA extraido de vilo corionico de oito biopsias realizadas entre a 10 e 12 semanas de gestacao, para amplificar um fragmento de 778 pb correspondente a sequencia do gene SRY ("primers" XES10-XES11) na determinacao do sexo fetal. Como controle interno da reacao amplificamos simultaneamente um fragmento de 650 pb do exon 6-8 do gene CYP21B, gene ativo da 21 hidroxilase ("primers" 5' GAGGGATCACATCGTCGTGGAGATG3' e 5'TTCGTGGTCTAGCTCCTCCTG3'). O protocolo utilizado na PCR foi 94 graus C - 2 min; 32 ciclos: 94 graus C - 1 min, 63 graus C - 1 min, 72 graus C- 2 min e um ciclo de extensao de 72 graus C - 10 min. Para confirmacao dos resultados da PCR realizou-se cariotipo a partir de cultura de celulas obtidas atraves de biopsia de vilosidade corionica. Em um caso o material nao foi suficiente para a realizacao do cariotipo. Este protocolo foi testado em 200 amostras de DNA extraido de leucocitos de homens e mulheres normais. A amplificacao do gene CYP21B ocorreu em todas as amostras enquanto a amplificacao do gene SRY apenas nas amostras dos homens. Das oito amostras de DNA extraidas de vilo corionico o gene SRY foi positivo em tres fetos masculinos e negativo nos cinco fetos femininos. O sexo fetal foi confirmado pelo cariotipo ou apos o nascimento. Nos concluimos que este protocolo representa um metodo facil, rapido e seguro de determinacao do sexo fetal