Etudes génétique, fonctionnelle et épidémiologique des ß-lactamases chez Fusobacterium nucleatum.

Fusobacterium est une bacterie commensale frequemment isolee dans diverses infections. Certaines souches sont resistantes aux beta-lactamines, ce qui peut conduire a des difficultes therapeutiques. Dans ce travail, nous avons identifie deux genes de resistance : le premier, blaFUS-1, code pour une beta-lactamase de classe D et le deuxieme, blaFNA-1, code pour une enzyme proche des beta-lactamases de classe A. L��enzyme FUS-1 presente des caracteristiques interessantes dont certaines concernent des elements conserves du site actif. Pour mieux comprendre les mecanismes catalytiques des beta-lactamases de classe D, nous avons conduit une etude des relations structure-fonction par cristallisation et mutagenese dirigee. Les resultats mettent en evidence l’importance du residu en position 68, sa mutation conduit a des changements de l’activite et de la stabilite de l’enzyme. La substitution S68T est assez favorable, ceci donne une explication rationnelle au fait que la Thr soit l’acide amine rencontre dans la plus grande majorite des enzymes de classe D. Le residu en position 116 semble egalement intervenir dans la conformation du site actif et l’orientation des residus essentiels a la catalyse. Enfin, la distribution des genes blaFUS-1 et blaFNA-1 a ete etudiee sur une collection de souches representatives. Elle montre que blaFUS-1 est le support essentiel de la resistance aux penicillines chez Fusobacterium nucleatum. L’identification par sequencage des ARNr 16s et rpoB montre une predominance nette de blaFUS-1 chez F. Nucleatum sous-espece polymorphum.