Aconitases vegetales : des proteines au(x) gene(s)

Deux proteines a activite aconitase (aco i et aco ii) ont ete purifiees a partir de graines de melon. La caracterisation de ces enzymes montre qu'il s'agit de deux proteines monomeriques d'un poids moleculaire apparent de 97 kda ayant des points isoelectriques proches de 5. La sequence de 14 residus de l'extremite nh#2 terminale est identique pour ces deux formes proteiques. Si les etudes biochimiques n'ont pas permis de les differencier, seul un anticorps monoclonal distingue aco i de aco ii. Dans le meme temps, des anticorps polyclonaux ont permis d'isoler d'une banque de chair de melon un clone d'adnc s'averant etre incomplet. En utilisant ce dernier comme sonde pour cribler une banque de siliques immatures, nous avons isole l'homologue chez arabidopsis thaliana. D'une longueur de 3210 pb, ce clone complet code pour une proteine d'un poids moleculaire calcule de 98490 da. La comparaison de la sequence proteique deduite de ces clones d'adn complementaires fait apparaitre une forte homologie de plus de 70% avec les ire-bp (iron responsive element binding protein) alors qu'elle est de l'ordre de 45% avec les aconitases mitochondriales. Ces proteines a activite aconitase sont homologues a plus de 90% entre cucumis melo et arabidopsis thaliana. Le sequencage genomique montre que la sequence codante du gene d'arabidopsis thaliana est morcelee en 20 exons. Une cartographie precise de l'initiation de la transcription a revele l'existence de cinq sites possibles dont un utilise preferentiellement. Enfin, nous avons suivi l'expression de ce gene au cours du developpement par hybridation sur arn totaux et par l'etude de l'expression du gene rapporteur -glucuronidase sous le controle d'un fragment promoteur. Les resultats preliminaires semblent montrer que ce gene presenterait une expression constitutive avec une augmentation forte lors de la maturation des grains de pollen et de la graine ainsi que lors de la germination