Avaliação da atividade anti-Candida de compostos purificados isolados de diferentes espécies de Mentha

Plantas medicinais tem sido alvo de estudos na descoberta de novos farmacos, por serem fontes de compostos potencialmente bioativos que atuam na manutencao da saude humana. A descoberta de novas substâncias antimicrobianas derivadas de produtos naturais, sao importantes no controle de microrganismos, principalmente, devido ao aumento de casos de resistencia a antimicrobianos convencionais. Nesse sentido, leveduras do genero Candida tem se tornado um problema a saude publica nas ultimas decadas devido ao aumento de infeccoes denominadas candidoses. Candida spp. possui mecanismos de virulencia, como o polimorfismo e formacao de biofilme, que facilitam o desenvolvimento da infeccao e dificultam seu tratamento. Paralelamente, estudos encontrados na literatura com Mentha spp. e seus compostos bioativos, descrevem sua acao antifungica. Sendo assim, o objetivo do trabalho foi avaliar a Concentracao Inibitoria Minima (CIM), Concentracao Fungicida Minima (CFM) de compostos isolados, a acao dos compostos sobre fatores de virulencia da levedura (biofilme e polimorfismo) e a acao citotoxica dos compostos sobre celulas HaCat. Os compostos isolados (carvona, mentona, mentofurano e pulegona), foram testados atraves da tecnica de microdiluicao em caldo de susceptibilidade a antifungicos (CSLI, 2008), em cepas de Candida spp. A cepa utilizada para os testes de biofilme e polimorfismo foi a Candida albicans MYA-2876. Os biofilmes em formacao e maduro foram pre- incubados por 2 e 24 horas respectivamente e posteriormente adicionados concentracoes decrescentes dos compostos. Ambos foram mensurados apos exposicao de 2 horas de XTT A490nm. O biofilme foi analisado atraves de Microscopio Eletronico de Varredura a fim de avaliar sua estrutura apos o tratamento com os compostos. O polimorfismo da levedura foi avaliado quantitativamente e qualitativamente quanto a capacidade do composto de inibir a formacao de hifas atraves da exposicao ao soro fetal bovino (SFB), com cultivo da cepa em meio liquido (analise microscopica) e solido (analise macroscopica). A acao citotoxica dos compostos foi avaliada em celulas HaCat, cultivadas em meio RPMI/SFB e foram quantificadas atraves da adicao de SRB e mensuradas a A530nm. Todos os compostos inibiram o crescimento das cepas testadas, sendo a menor CIM encontrada de 0,125 mg/mL. Os compostos inibiram ate 99% o biofilme em formacao e desconstruiu em ate 97% do biofilme maduro. Atraves de MEV, observou-se que o tratamento com os compostos provocou alteracoes do envelope celular das leveduras. As leveduras expostas aos compostos no teste de formacao de hifas em meio liquido, com avaliacao microscopica, mostraram diminuicao de formacao de hifas. Os compostos que apresentaram modificacoes macroscopicas na morfologia das colonias foram carvona e pulegona. A analise quantitativa de formacao de tubos germinativos teve inibicao de ate 86%. O ensaio de citotoxicidade mostrou viabilidade celular acima de 50% apos exposicao aos compostos. A partir dos resultados obtidos, podemos afirmar que os compostos testados apresentam atividade antifungica, possuem acao sobre os fatores de virulencia da levedura, como formacao de biofilme e polimorfismo e demonstram baixa citotoxicidade, podendo ser potenciais fontes para producao de novos produtos farmacologicos antifungicos. Abstract