人HSV-1 UL40基因重组质粒的构建及其在siRNA筛选中的应用

目的：快速筛选出高效沉默人HSV-1 UL40基因的siRNA，为进一步应用RNA干扰的相关研究奠定基础。方法：应用RT-PCR扩增人HSV-1F株UL40基因，将其连接到pEGFP-N1构建pEGFP-N1-UL40融合蛋白表达质粒。将化学合成的针对UL40基因的siRNA与重组质粒共转染Vero细胞，通过观察绿色荧光蛋白报告基因的表达筛选高效沉默人HSV-1 UL40基因的siRNA。结果：倒置荧光显微镜观察发现设计的4对siRNA中siRNA3和siRNA4能明显降低绿色荧光蛋白的表达，流式细胞仪检测证明siRNA3和siRNA4对目的基因沉默效率分别达到76．99％和84．00％。结论：成功构建了人HSV-1UL40基因融合表达载体pEGFP-N1-UL40，并利用该载体筛选出2对高效沉默人HSV-1UL40基因的siRNA。