应用酚提取法纯化孕妇血浆及血清中胎儿游离DNA

目的应用酚提取法以提高纯化孕妇血中胎儿DNA的浓度,并应用套式PCR技术确定男性胎儿SRY基因的存在.方法孕妇血浆和血清5～10 ml采自孕龄为7～38周孕1产0的孕妇26名.其中孕男性单胎正常孕妇18名,孕女胎正常孕妇8名.加入等体积的苯酚∶氯仿∶异戊醇抽提,并经冰浴离心,所得DNA应用套式PCR技术确定男性胎儿SRY基因的存在.结果血浆标本在第1次PCR扩增后有12名出现351 bp的阳性扩增带.其余6名在第2次扩增后出现254 bp的阳性扩增带.第1次扩增确定性别的准确率是72.2%,第2次扩增是100%.血清标本在第1次扩增后有9名出现351 bp阳性扩增带,第2次有16名出现254 bp阳性扩增带.第1次扩增确定性别的准确率为50%,两次准确率共为88.9%.同时对2例X-连锁遗传病患者(假性肥大性肌营养不良症和无汗性外胚层发育不良症的患者)进行了产前性别判断.结论单纯应用酚提取的方法也可以纯化孕妇血浆及血清中胎儿游离DNA的浓度,可以应用较大量的孕妇血浆及血清进行DNA提取,以获得较高胎儿DNA的浓度.加用套式PCR使确定胎儿性别的准确率得到提高.提示可用此方法对有X-连锁遗传病家族史的患者进行产前性别判断.