Simultaneous elimination of T- and B-cell epitope by structure-based mutagenesis of single Glu80 residue within recombinant staphylokinase

减少 recombinant staphylokinase 的 immunogenicity，在野类型的 staphylokinase (wt-Sak ) 的 Glu80 残余的基于结构的 mutagenesis 讲道理地被设计并且由修改 QuikChange 指导地点的 mutagenesis 执行了。包括 Sak (E80A ) 和 Sak (E80S ) ， Sak 异种成功地在 E 被表示。是的 coli DH5 一可溶的细胞质的蛋白质并且占了超过 40% 全部的细胞的蛋白质。表示蛋白质被一个三步的色析法的纯化过程净化。SDSPAGE 和 HPLC 分析结果显示净化的蛋白质是几乎完全同类的， Sak 异种的纯净超过了 97% 。fibrinolytic 活动的分析表明有丝氨酸和丙氨酸的 E80 残余的替换导致了 Sak 异种的稍微增加的特定的活动。Sak 异种的 immunogenicity 的调查证明特定的 anti-Sak IgG 抗体的数量由 Sak (E80A ) 得到了，在 BALB/c 老鼠的 Sak (E80S ) 减少了 35% 和 27% ，分别地与 wt-Sak 相比。Sak 异种的能力显著地 wt-Sak 比那些降低从 BALB/c 老鼠刺激 T 房间的增长并且绑 polyclonal 浆液是的老鼠 anti-Sak。这些结果建议由丙氨酸和丝氨酸的 Glu80 残余的替换成功地消除了 T 房间的部分和 Sak 分子的 B 房间 epitope。我们的调查结果建议 T 房间和 B 房间 epitopes 的那同时的消除是一个有用方法减少 wt-Sak 分子的 immunogenicity 并且为为尖锐心肌的梗塞的临床的处理设计安全基于 Sak 的 fibrinolytics 提供了策略。