联合基因Survivin、CDK1的shRNAs靶向干扰对鼻咽癌CNE-2细胞增殖的影响

为了构建具有干扰效应的靶向Survivin和 CDK1 基因及两者串联的短发夹样RNA(short hairpin RNA，shRNA)表达载体，并研究其靶向干扰对鼻咽癌细胞CNE-2生物学行为的改变。本研究通过构建pU6-Survivin shRNA 、pU6- CDK1 shRNA 和pU6-Survivin shRNA - CDK1 shRNA 重组载体，用脂质体Lipofectamine 2000法将其转染入CNE-2细胞株中，应用RT-PCR方法初步筛选具有干扰效应的重组载体，逆转录实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测Survivin、 CDK1 mRNA的基因表达水平，Western blot 检测Survivin和CDK1蛋白表达以及MTT法检测癌细胞增殖活性的变化。结果表明：成功构建具有干扰效应的shRNAs表达载体；联合或单基因Survivin、 CDK1 的shRNAs表达载体干扰CNE-2细胞后，其对应的mRNA和目的蛋白表达均降低，CNE-2癌细胞增殖活性降低，联合基因shRNAs表达载体具有一定程度的干扰增强作用。