Estructuras cristalográficas de proteínas de virus animales implicadas en la interacción virus-hospedador

Los reovirus aviares Los reovirus aviares son virus no envueltos con un genoma segmentado de dsRNA compuestos por una doble capside icosahedrica. La proteina ?C es la fibra del reovirus aviar y es la proteina encargada de unirse a su receptor celular (todavia desconocido). En el presente trabajo se ha resuelto la estructura del dominio de cabeza y una parte del dominio fibroso. A partir de los datos estructurales se han localizado dos regiones que podrian estar potencialmente involucradas en la interaccion con el receptor. Ademas se han descrito los determinantes moleculares que median su oligomerizacion y se ha discutido sus implicaciones en la biologia del reovirus aviar. La proteina ?A tiene una doble funcion en la biologia del reovirus aviar, por un lado tiene una funcion estructural estabilizando la capside interna y promoviendo la formacion de la capside externa y por otro lado ha sido implicada en la resistencia que el reovirus aviar presenta a la accion antiviral del interferon. En el presente trabajo se ha propuesto un modelo basado en evidencias estructurales con el que la proteina ?A compite con la proteina PKR por el dsRNA, impidiendo de esta manera que la PKR se active e inhibiendo la accion antiviral del interferon. Los experimentos de mutagenesis dirigida, gel shift y ultracetrifugacion analitica apoyan el modelo que podria tener una relevancia general para todos los reovirus fusogenicos. El adenovirus aviar 1 El adenovirus aviar 1 es un virus relativamente benigno que ha despertado interes para su uso en terapia genica. Su caracteristica mas destacada es que en cada uno de sus vertices coexisten dos proteinas fibrosas trimericas, una fibra corta y una larga. Estudios biologicos han mostrado que la fibra larga es la responsable de que el adenovirus aviar infecte mejor celulas que expresen el receptor humano CAR en su superficie. Sin embargo, esta fibra no parece ser esencial para el proceso de infeccion, lo que la convierte en una diana atractiva para su modificacion. En este trabajo se ha resuelto la estructura del dominio globular de la fibra larga. Un analisis de la estructura muestra que este dominio es incapaz de interaccion con el dominio D1 de CAR al menos de la misma manera en que lo hacen sus homologos humanos. Este resultado ha sido confirmado por experimentos de cromatografia de exclusion molecular y SPR. El adenovirus porcino 4 El adenovirus porcino 4 tiene una fibra con una arquitectura inusual. Ademas de los clasicos dominios fibroso y globular que muestran las fibras de adenovirus presenta dos dominios C-terminales extra, un dominio que contiene un motivo RGD de interaccion con integrinas y un dominio C-terminal de tipo galectina. En este trabajo hemos resuelto la estructura del dominio globular y el de tipo galectina. La estructura del dominio globular muestra que la conformacion de los bucles implicados en el reconocimiento de los receptores clasicos de adenovirus no esta conservada por lo que probablemente este dominio sea incapaz de reconocerlos. La estructura del dominio de galectina muestra la disposicion de sus dominios CRD (dominios de reconocimiento de carbohidratos) algo que no habia sido posible hacer hasta ahora. Se determinaron los azucares con los que esta galectina es capaz de interaccionar mediante un microarray. Finalmente se resolvio la estructura de los complejos galectina-azucar en donde se puede apreciar que residuos estan implicados en esta interaccion. Estos resultados permitiran el diseno de nuevos vectores de terapia genica que reconozcan azucares especificos en la superficie de las celulas diana.