PRODUÇÃO DE ANTICORPOS MONOCLONAIS ANTI-TOXOPLASMA GONDII PARA DIAGNÓSTICO EM FEZES E SOROS DE CRIANÇAS EM ÁREA HIPER-ENDÊMICA PARA A TOXOPLASMOSE

Em Campos dos Goytacazes, cerca de 80% da populacao de baixo poder aquisitivo apresenta-se infectada pelo parasita Toxoplasma gondii. O percentual de infeccao na populacao de 0 – 4 anos de idade apresenta-se menor do que se poderia supor. Este trabalho tem como objetivo produzir anticorpos monoclonais contra antigenos do Toxoplasma gondii visando subsidiar protocolo para o diagnostico da toxoplasmose em soro e fezes de criancas com risco de infeccao na faixa etaria de 0 a 4 anos. Camundongos BALB/C femeas foram imunizados com antigeno de T. gondii e, o camundongo que apresentou maior titulacao teve seu baco retirado para fusao dos esplenocitos com celulas de mieloma. Os hibridomas positivos ao ELISA foram clonados e subclonados para obtencao de monoclones que produzissem anticorpos especificos ao reconhecimento do antigeno. Posteriormente, utilizou-se os hibridomas positivos para producao de ascite em camundongos. Os ascites obtidos foram submetidos a precipitacao sequencial com acido caprilico e sulfato de amonio para purificacao das imunoglobulinas e posterior utilizacao das mesmas em testes imunodiagnosticos. Dos 3 hibridomas que permaneceram positivos apos a subclonagem, um (9G41/15) apresentou-se positivo apenas pelo metodo de ELISA. Os outros dois hibridomas (2E4/4 e 2E4/19) reconheceram especificamente o antigeno pelo metodo de Imunoblotting, mas nao reconheceram por ELISA. Os anticorpos que foram produzidos pelos hibridomas (2E4/4 e 2E4/19) reconheceram tres bandas na faixa de 30 kDa, dado importante visto que a p30 e uma proteina altamente imunogenica, que induz a producao de anticorpos IgG, IgM e IgA relevantes no contexto da resposta imune ao T. gondii. Os anticorpos purificados dos liquidos asciticos tambem estao sendo novamente testados quanto ao reconhecimento pelo parasita. Anticorpos monoclonais anti-T. gondii foram produzidos com sucesso e serao, futuramente, submetidos a marcacao por biotina para utilizacao como ferramentas de diagnostico para toxoplasmose em ensaios em fluidos corporais (soros, plasma, humor aquoso) e fezes de criancas.