HBx通过抑制microRNA-145a-5p促进小鼠肝癌发生

目的通过研究miRNA-145a-5p在肝前体细胞和小鼠感染乙肝病毒X(hepatitis B virus X，HBx)不同时间的变化情况，初步探讨HBx导致肝癌发生的机制。 方法通过慢病毒将HBx基因转染到14-19肝前体细胞中，构建HBx-EGFP-14-19细胞系，并通过肝门静脉将HBx-EGFP-14-19细胞悬液注入KM小鼠体内，建立具有完整免疫系统的HBx小鼠模型，并分别于30、90、180、360 d收集肝脏组织。通过qRT-PCR和Western blot检测HBx在HBx-EGFP-14-19细胞和HBx小鼠中的表达。将miR-145a-5p mimics和inhibitor转染到HBx-EGFP-14-19细胞和饲养180 d HBx小鼠中，qRT-PCR检测miR-145a-5p、c-Myc、Kras、细胞凋亡和细胞周期因子的RNA表达，Western blot检测c-Myc、Kras、细胞凋亡和细胞周期因子的蛋白质表达，CCK-8检测细胞增殖。 结果成功构建能够稳定表达HBx的细胞模型和动物模型。HBx过表达后，miR-145a-5p在HBx-EGFP-14-19细胞和HBx小鼠中的表达下调，而c-Myc和Kras的表达升高。使用miR-145a-5p模拟物(mimic/agomir)可以抑制细胞增殖并下调c-Myc、Kras、Bcl-2、CDK4、Cyclin E、CyclinD1的表达，并上调Bad和Bax的表达，而miR-145a-5p抑制剂(inhibitor/antagomir)与miR-145a-5p模拟物组的结果相反。 结论HBx过表达导致小鼠肝癌发生，其机制可能与HBx调节miR-145a-5p及其靶基因c-Myc和Kras的表达和抑制细胞凋亡有关。