Получение, биохимическая характеристика и структура рекомбинантной эндо-1,4,b-ксиланазы XylE

Ген xylE эндо 1,4-ƒ-ксиланазы десятого семейства гликозил-гидролаз мицелиального гриба Penicillium canescens экспрессирован под контролем сильного промотора гена bgaS, кодирующего ƒ-галактозидазу P. canescens и получен штамм - продуцент эндоксиланазы XylE. Фермент выделен в гомогенном состоянии (специфическая активность 50 ед/мг) и исследованы его физико-химические и биохимические свойства. Максимальная ферментативная активность наблюдалась при рН 6,0 и 70. Эндоксиланаза XylE является вы- сокостабильным ферментом, период полуинактивации фермента ƒ1/2 при 60 равен 7 ч. Кинетические пара- метры, определенные по березовому ксилану, равнялись 0,52 мг/мл (Km) и 75 мкМоль/мин/мг (Vmax). Полу- чены кристаллы эндоксиланазы XylE и решена трехмерная структура с разрешением 1,47 Е. Впервые опре- делена кристаллическая структура эндо 1,4-ƒ-ксиланазы 10 семейства, содержащая углеводы и уникальную циклическую структуру на С-конце.