AVALIAÇÃO DA AÇÃO GENOTÓXICA DE NANOPARTÍCULAS DE ÓXIDO DE NÍQUEL, IN VITRO

A nanotecnologia tem como principio basico a sintese, modificacao e manipulacao de nanoparticulas. Do ponto de vista toxicologico, esses nanomateriais sao interessantes devido a sua grande area superficial em relacao a massa, pois tendem a ser mais reativos quando comparados aos mesmos componentes em macro escala. Alem disso, podem ter o potencial de danificar o DNA. O niquel e um metal de transicao e e o quinto elemento mais abundante no mundo, logo, as nanoparticulas (NPs) de oxido de niquel (NiO) possuem uma vasta aplicabilidade no setor industrial como materia para a producao de baterias, tintas, sensores magneticos e combustiveis. Este trabalho teve como objetivo avaliar o efeito genotoxico de NPs de NiO atraves do teste Cometa, buscando o entendimento de como estes nanomateriais podem interagir em diferentes niveis celulares, uma vez que esses estudos tornam-se fundamentais para a protecao da integridade do ser humano e do meio ambiente. No teste Cometa, foram utilizadas celulas V79, cultivadas em frascos em meio DMEM (Gibco), com 10% de soro fetal bovino (Gibco) e 1% de penicilina/estreptomicina (Gibco) em uma incubadora com 5% de CO2 a 37oC. No experimento, as celulas foram transferidas para placas de cultivo celular, onde foram adicionadas em cada poco, aproximadamente 100.000 celulas. Apos 24 horas foram adicionadas as seguintes concentracoes de NPs de NiO: 15;31;62;125;250 e 500μg/ml, juntamente com o controle positivo EMS (Etilmetanosulfonato – 0,5mM) e o controle negativo, H 2 O destilada, durante um periodo de 4 horas. Apos, as celulas foram tripsinizadas, neutralizadas e homogeneizadas com gel de agarose de baixo ponto de fusao e distribuidas sobre lâminas de vidro previamente cobertas com agarose de ponto de fusao normal. As lâminas foram mergulhadas em solucao de lise e submetidas a eletroforese em condicoes alcalinas, coradas com brometo de etidio e submetidas a leitura em aumento de 200X em microscopia de fluorescencia, onde os nucleos das celulas portadores de quebras de DNA puderam ser visualizados sob a forma de um cometa. Foram avaliados, para cada tratamento, a extensao dos danos no DNA, classificando-se os cometas por meio de um Software ( Comet Assay IV), onde o parâmetro utilizado para a avaliacao de danos foi a percentagem de DNA na cauda. Nos dados, utilizou-se a analise da variância (ANOVA) com teste post hoc de Dunnett para uma significância estatistica de P<0,05. Apos a exposicao de celulas V79 as diferentes concentracoes de NPs de NiO, foi possivel observar um aumento significativo na frequencia de danos no DNA das celulas expostas as concentracoes de 62, 125, 250 e 500 µg/mL quando comparado ao controle negativo. Os resultados demonstram que as NPs de NiO induzem aumentos significativos de  danos no DNA das celulas V79 expostas a concentracoes superiores a 62 µg/mL no ensaio Cometa. Estes dados, somados aos da literatura, contribuem para a caracterizacao do perfil genotoxico de nanomateriais.