Transgenic expression of human α1,2-fucosyltransferase (HT) in porcine arterial endothelial cells to confer resistance to human serum-mediated cytolysis

目的 研究转人α1,2岩藻糖苷转移酶(HT)基因克服异种移植超急排斥反应(HAR)的作用.方法 构建pcDNA3-HTcDNA重组质粒,体外培养猪动脉内皮细胞(PAEC),脂质体转染法将pcDNA3-HTcDNA转染PAEC,新霉素(G418)筛选具有抗性的细胞克隆,PCR检测重组基因的整合,流式细胞术(FCM)检测转染细胞H抗原和异种抗原α-Gal表达.分别以未转染的PAEC和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)作对照.将转染细胞和正常细胞分别以20%、40%和60%人血清孵育2 h,比较溶破细胞百分数.结果 重组质粒转染PAEC经筛选得到抗性细胞克隆,PCR扩增出人HT基因片段,FCM检测正常PAEC与转染PAEC,α-Gal平均荧光强度由1346.81降至194.44,H抗原平均荧光强度由9.10增至215.93;α-Gal M2区由99.98%降至37.18%,H抗原M2区由13.80%升至78.54%.转染细胞以人血清孵育后溶破细胞百分数较正常细胞降低,分别由(32.32±2.37)%、(59.54±4.56)%和(71.46±5.94)%降至(15.78±2.69)%、(30.16±1.46)%和(40.48±3.77)%,差异均有统计学意义(P值均＜0.05).结论 转人HT基因PAEC α-Gal表达明显降低,H抗原表达升高,对人血清溶破的耐受性增强.转人HT基因可以一定程度抑制HAR。