Actividad ATP hidrolasa asociada a ribosomas humanos como nuevo indicador para evaluar fármacos in vitro

En todos los ribosomas de mamiferos estudiados hasta el presente se ha identifi cado una actividad ATP hidrolasa (ATPasa) asociada. Su papel en el mecanismo de sintesis de proteinas esta siendo estudiado actualmente y existen evidencias de homologia funcional con el factor de elongacion 3 (EF3) de hongos. Para caracterizar la actividad ATPasa ribosomal humana, se aislaron ribosomas 80S de placenta humana y se estudiaron los parametros cineticos de dicha actividad. La velocidad de hidrolisis (0,50 ± 0,05 nmol Pi/A26080S/ min) a concentracion fi siologica de ATP (3 mmol/L) y la constante de catalisis aparente (0,5 ± 0,1 s-1) estan en el rango reportado para otros ribosomas eucarioticos. Los valores aparentes de Vmax (0,65 nmol Pi/A26080S/min) y KM (58 μmol/L), determinados por analisis de Lineweaver-Burk, tambien son comparables a los reportados para ribosomas de otros mamiferos. El analisis de Eadie-Hofstee indico la presencia de cooperatividad positiva, con un KM aparente de 15 μmol/L para la forma mas activa de la enzima. La ATPasa fue inhibida por metavanadato (inhibidor de EF3), y por los antibioticos emetina (inhibidor de la translocacion) y anisomicina (actua sobre los sitios ribosomales A y E). Ademas, la actividad no fue afectada por antibioticos especifi cos para otras funciones ribosomales en eucariotes ni tampoco por bloqueadores del ribosoma bacteriano. La sencillez y bajo costo del ensayo de actividad ATPasa ribosomal lo hacen ideal para el diseno de pruebas de alto rendimiento in vitro que harian posible tomar decisiones tempranas sobre el posible uso terapeutico en humanos de nuevos antibioticos o fungicidas