本生烟脂质转移蛋白基因克隆及 VIGS 沉默载体和过量表达载体构建

非特异性脂质转移蛋白 (non-specific lipid transfer proteins, nsLTPs) 是植物中大量存在的小分子脂类结合蛋白，具有多种生物学功能。为研究 nsLTPs 在调控植物应答生物与非生物胁迫的反应中起的作用，本研究以本生烟 ( Nicotiana benthamiana ) 为材料，成功克隆非特异脂质转移蛋白 NbLTP1 全长基因，其开放阅读框序列为 360 bp ，编码 119 个氨基酸，分子重量为 12.44 kD ，为疏水性蛋白，等电点为 7.45 。对 NbLTP1 蛋白质三级结构进行了预测和分析，并进一步构建了烟草脆裂病毒 ( Tobacco rattle virus , TRV) 介导的病毒诱导的基因沉默载体 TRV: NbLTP1 。荧光定量 PCR 结果表明通过 VIGS 可以显著抑制 NbLTP1 基因的表达。此外还通过 In-Fusion 克隆技术快速成功构建了 pCAMBIA1305 - NbLTP1 - 3*HA 过量表达载体。本研究为下一步遗传转化、后续研究 NbLTP1 调控植物防御生物与非生物胁迫的分子机理、培育新种质提供理论依据。