Producción en bacterias de minianticuerpos anti-gluten recombinantes.

Motivacion: La celiaquia afecta a un 1% de la poblacion y se caracteriza por una intolerancia al gluten que obliga a seguir una dieta libre del mismo (1). La deteccion cuantitativa de gluten en alimentos, necesaria para garantizar su aptitud para el consumo por celiacos, utiliza anticuerpos monoclonales (mAbs). La empresa Biomedal S.L. comercializa kits basados en mAbs que reconocen especificamente los peptidos del gluten toxicos para los celiacos (2). Nos hemos propuesto identificar las secuencias de estos mAbs responsables de la afinidad a gluten, disenando a partir de ellas anticuerpos minimizados de cadena sencilla (scFv) para producirlos en bacterias como alternativa a los cultivos de hibridomas (3), posibilitando una reduccion en los costes de produccion y la construccion de variantes mejoradas. Describimos las estrategias seguidas y los inmunoensayos posteriores (4), realizados para confirmar que los minianticuerpos obtenidos mantienen la especificidad de union al gluten. Metodos: Utilizando la tecnica de RT-PCR y una combinacion de cebadores especificos y degenerados, se amplifico el cDNA codificante de las regiones hipervariables de las cadenas ligera y pesada de uno de los mAbs y se clono en un vector para su expresion recombinante como scFv. Se llevaron a cabo ensayos de expresion utilizando una cepa especializada de Escherichia coli, identificandose mediante SDS-PAGE, Western blot y ELISA las condiciones de cultivo e induccion (temperatura, concentracion del inductor) optimas para la produccion del scFv correctamente plegado y funcional. Finalmente, el scFv anti-gluten se purifico mediante cromatografia de afinidad IMAC. Resultados: Se ha conseguido clonar en un vector bacteriano la secuencia codificante de un scFv recombinante anti-gluten. Tras optimizar las condiciones de expresion, los inmunoensayos han confirmado que el minianticuerpo producido en bacteria reacciona especificamente con el gluten. Finalmente, se ha comprobado que el scFv purificado mediante IMAC es funcional. Conclusiones: La expresion recombinante de un scFv anti-gluten en E. coli ha permitido comprobar su funcionalidad como version minimizada del anticuerpo monoclonal original, posibilitando su produccion fermentativa y el futuro desarrollo de nuevas variantes moleculares utiles como herramientas biotecnologicas y de investigacion, en el campo de la enfermedad celiaca.  (Las actividades descritas se han desarrollado en el marco del proyecto Bio-AndaluS, apoyado por el CDTI y por la Agencia IDEA y cofinanciado por el programa FEDER - INNTERCONECTA 2012)