Propagação de car (cilia-associated respiratory) bacillus em cultura de células e padronização da reação da polimerase em cadeia com transcrição reversa (rt-pcr

CAR bacillus e uma bacteria extracelular, gram negativa, que esta associada a doenca respiratoria em colonias convencionais de camundongos e ratos. O objetivo deste estudo foi realizar a padronizacao do RT-PCR a fim de detectar a infeccao por CAR bacillus em colonias de ratos e camundongos. A cepa CB-M proveniente do CIEA (Japao) foi utilizada nos experimentos. Celulas murinas 3T3 fibroblastoides foram infectadas e quando do aparecimento de efeito citopatico, congeladas. A bacteria foi visualizada atraves da coloracao pela prata. Grupos de camundongos foram infectados atraves de inoculacao intranasal e amostras de swabs oral, nasal, traqueia e pulmao foram coletadas nos dias 7,12,15,19,28 apos a infeccao. O RNA foi extraido usando TRIzol para posterior amplificacao. Primers especificos foram testados sob diferentes concentracoes. Os soros foram submetidos a imunofluorescencia indireta para a deteccao de anticorpos, atraves de celulas 3T3 infectadas. A presenca da bacteria na suspensao celular foi confirmada atraves do RT-PCR e o produto amplificado de 133 pares de base observado. Resultados positivos no RTPCR dos pulmoes foi obtido nos dias 15,19 e 28 pos infeccao e anticorpos apos 8 semanas.