Lipid A foszforilációs- és acilációs izomereinek elválasztása és jellemzése NACE-ESI-MS/MS módszerrel

Lipid A is the anchor of endotoxins on the surface of Gram-negative bacteria. In the human body, it is a prominent stimulator of the immune system, but it may also cause dangerous medical conditions, such as endotoxic shock and sepsis. To reveal the specific structural parts and molecular heterogeneity of lipid A isolates, such as the site of phosphorylation and type of fatty acyl chains, a pressure-assisted non-aqueous capillary electrophoresis – tandem mass spectrometry method was developed. Baseline separation of both phosphorylation and acylation isomers was achieved. Identification was carried out from the tandem mass spectra recorded in the positive ionization mode. B-type ions are formed by diagnostic neutral losses. B2 type ions are confirming the site of phosphorylation, while B1 type ions and other fragments are enabling the characterization of acylation isomers. This novel method should be regarded as an orthogonal technique to formerly developed LC‐MS/MS methods in the screening of bacterial samples or lipid A based therapeutics. Kivonat Az endotoxinok a lipid A reszukkel agyazodnak be a Gram-negativ bakteriumok sejtmembranjaba. Az emberi szervezetben a lipid A hatekonyan stimulalja az immunrendszert, de akar sulyos egeszsegi allapotokat is előidezhet, mint az endotoxikus sokk, vagy a szepszis. A szerkezetenek reszleteinek megismeresere es a lipid A izolatum alkotoinak valtozatossagat – ugymint a foszforilacios helyek es a kapcsolodo zsirsavlancok tipusat – feltarando kifejlesztettunk egy nyomassal segitett nemvizes kapillaris elektroforezis–tandem tomegspektrometrias modszert. A foszforilacios- es az acilacios izomereknel is sikeres alapvonali elvalasztast ertunk el. A szerkezeti informaciot a pozitiv ion modban felvett tandem tomegspektrumok szolgaltattak. Diagnosztikus semleges vesztesekkel B-tipusu ionok keletkeznek. A B2-tipusu ionok azonositjak a foszforilacios poziciot, mig a B1 ionok az acilacios izomerek jellemzeset teszik lehetőve. Jelen modszer a korabban kifejlesztett LC-MS/MS modszerek kiegeszitője lehet a bakterialis eredetű mintak vizsgalataban es a lipid A klinikai alkalmazasakor.