33株抗心肌肌钙蛋白T (cTnT)的单克隆抗体制备、鉴定及应用

旨在制备抗心肌肌钙蛋白T (cTnT)的单克隆抗体(mAb)，对单抗进行初步评价鉴定，并建立(cTnT)的化学发光定量检测试剂。首先利用外购的cTnT抗原免疫BALB/c小鼠，利用常规mAb制备技术和间接ELISA法筛选mAb，以表达和合成的cTnT片段对筛选到的mAb进行表位鉴定。使用双抗体夹心ELISA方法筛选检测cTnT抗原的配对mAb，并建立cTnT全自动化学发光定量检测试剂。使用220例临床标本评价该试剂与罗氏试剂的检测一致性，另外使用238例临床样本和784例体检人群样本评价该试剂的临床应用。我们成功筛选到33株稳定分泌抗cTnT抗体的杂交瘤细胞株，并对单抗的表位进行初步鉴定。我们筛选到能检测10 pg/mL cTnT抗原的配对mAb E16H8和C8G11，并使用该配对研制出全自动化学发光定量试剂。该试剂与罗氏试剂相关系数 r 达到0.959 9，检测一致率95%，利用该试剂盒检测临床样本灵敏度为97.5%，特异性为99.15%，99%体检人群的cTnT浓度分布小于0.080 6 ng/mL，符合WHO对急性心肌梗死的定义标准。综上，初步建立了cTnT诊断优势表位单抗，并利用这些优势表位的单抗建立全自动管式化学发光定量检测试剂，与罗氏试剂检测结果符合率高。