胱抑素C的IgG-和IgY-ELISA检测体系的建立与评价

目的建立适用于检测人胱抑素C（Cystatin C）的IgG与IgY双抗体夹心ELISA检测体系。方法以人Cystatin C作为抗原免疫产蛋的罗曼鸡和新西兰兔,纯化抗Cystatin C的鸡抗体IgY和兔抗体IgG,并分别建立三种ELISA夹心检测体系,I：捕捉抗体IgG＋检测抗体IgY＋抗鸡IgY酶标抗体;Ⅱ：捕捉抗体IgG＋检测抗体IgY＋兔F（ab＇）2抗鸡酶标抗体;Ⅲ：捕捉抗体IgY＋检测抗体IgG＋抗兔IgG酶标抗体。通过比较Cystatin C的最低检测浓度和阴性对照的OD值评价三种夹心法的灵敏度和特异性。结果体系I的Cystatin C最低检测浓度为7.5ng/mL（阴性对照OD值为0.737）,体系Ⅱ的Cystatin C最低检测浓度为13ng/mL（阴性对照OD值为0.313）,体系Ⅲ的Cystatin C最低检测浓度为10ng/mL（阴性对照OD值为0.31）。结论成功建立了Cystatin C的双抗体夹心ELISA检测体系,体系I的灵敏度最高但其特异性差,体系Ⅱ和Ⅲ的检测灵敏度和特异性均较好,可以用于Cystatin C的检测。