TaqMan—MGB荧光定量RT—PCR快速检测副流感3型病毒

目的：建立特异、快速、灵敏的荧光定量RT—PCR方法用于副流感3型病毒核酸检测。方法：对副流感3型病毒的N基因应用ClustalW软件进行序列同源性比对，在保守区设计特异性引物和TaqMan—MGB探针，并对荧光RT—PCR反应条件进行优化，验证方法的特异性，敏感性和稳定性，同时应用于疑似患者临床标本检测。结果：该方法对副流感3型病毒核酸检测有高度特异性，与副流感1、2、4型，甲型、乙型流感病毒，麻疹病毒，风疹病毒，腮腺炎病毒，呼吸道合胞病毒和腺病毒等均无交叉反应。检测的灵敏度达0．1TCID50,可从疑似患者含漱液标本中直接检出，从病毒核酸提取至完成检测仅需3h左右。结论：本研究建立的TaqMan荧光定量RT—PCR是一种快速检测副流感3型病毒特异、敏感的方法，适用于临床早期诊断。