Establishment of murine multi-drug resistant leukemia model expressing enhanced green fluorescent protein

目的 建立增强型绿荧光蛋白(EGFP)基因标记的小鼠多药耐药白血病模型.方法以磷酸钙沉淀法将pLNG-EGFP质粒导入ФNX-E包装细胞,用脂质体转染的方法获得高滴度的EGFP病毒,并转导入小鼠多药耐药白血病细胞;采用悬浮细胞培养观察该细胞的生长规律;流式细胞术分析细胞周期分布;RT-PCR方法检测mdr1a基因表达;体内接种观察白血病发病情况并比较其耐药性的变化.结果将pLNG-EGFP质粒导入ФNX-E包装细胞后,收集细胞培养上清,病毒滴度为(4.5±3.4)×106CFU/mL.病毒转染后的小鼠多药耐药白血病细胞P388/VCR-G能稳定地表达绿色荧光.与P388/VCR细胞相比,P388/VCR-G细胞倍增时间、周期分析无明显差异;RT-PCR检测mdr1a基因的结果为:P388/S-G细胞阴性,P388/VCR-G细胞阳性.P388/VCR-G细胞在DBA小鼠体内也具有耐药性.所有接种P388/VCR-G细胞的DBA小鼠均死于腹水型白血病.结论建立了在体内稳定表达EGFP的小鼠多药耐药白血病模型,为研究多药耐药提供一种新的工具。