Role des proteines g heterotrimeriques et des phosphoinositides 3 phosphate dans le controle de la macro autophagie

La macroautophagie est une des voies majeures du catabolisme des proteines endogenes et du renouvellement des organites intracellulaires. L'etape initiale (etape de sequestration autophagique) est caracterisee par la formation d'une vacuole autophagique qui fusionne avec le lysosome, et permet la degradation du materiel sequestre. Des travaux effectues par notre equipe ont montre que cette etape etait controlee par une proteine g heterotrimerique : gi3. Afin de mieux caracteriser la regulation macroautophagique, nous avons abordes trois questions : (1) la localisation de gi3 est-elle essentielle pour le controle de l'autophagie ?, (2) quelles sont les proteines qui peuvent interagir avec gi3, et controlent l'autophagie, et (3) quel est le role joue par la voie des pi-3k dans le controle de l'autophagie. La construction de proteines chimeriques gi2/gi3 et gi3/gi2 nous a permis de determiner l'importance de la localisation endomembranaire de gi3 (au niveau plus particulierement de l'appareil de golgi et du reticulum endoplasmique) pour son action sur l'autophagie. De plus, nous avons caracterises une proteine de 24 kda capable d'interagir avec gi3. Cette proteine est la gaip (g-alpha interacting protein), membre de la famille des rgs (regulator of g protein signalling), qui a la capacite de stimuler l'activite gtpasique de sous unite de proteines g heterotrimeriques. Nous avons montres que la gaip interagit specifiquement avec la gi3 et que le niveau de sequestration autophagique est medie par la gaip en modulant l'activite gtpasique de gi3. Enfin, afin de definir le mode d'action de l'inhibiteur specifique de la sequestration autophagique, la 3-methyladenine (3-ma), nous nous sommes interesses au role des pi-3k dans le controle