Estudo dos mecanismos moleculares de resistencia a claritromicina e tetraciclina em linhagens de Helicobacter pylori

Helicobacter pylori e uma bacteria Gram-negativa e microaerofilica associada a diversas doencas gastricas, como gastrite cronica, ulcera peptica e câncer gastrico. As terapias de erradicacao do H. pylori geralmente consistem no uso de dois ou tres antimicrobianos combinados com um inibidor de bombas de protons. Em geral, o metronidazol, a cIaritromicina e a amoxicilina usados na terapia de erradicacao, enquanto os tratamentos com tetraciclina sao utilizados como uma segunda opcao em pacientes que nao erradicaram a bacteria. Embora os tratamentos anti-H. pylori ainda sejam muito efetivos, recentemente as taxas de erradicacao tem sido influenciadas negativamente pelo aumento no numero de bacterias resistentes. o uso indiscriminado da cIaritromicina tem resultado em um aumento na taxa de resistencia a este antibiotico, sendo considerado como a principal causa da falha terapeutica. A resistenda do Helicobacter pylori a cIaritromicina tem sido associada as mutacoes A2142G e A2143G no gene 235 rRNA. Ate o fim do seculo passado a resistencia a tetraciclina nao era muito comum, entretanto, nos ultimos anos esta resistencia vem aumentando. Alguns estudos indicam que o mecanismo molecular de resistencia a tetradclina esta relacionado a mutacoes no sitio primario de ligacao deste antibiotico, localizado no gene 165 rRNA. Os objetivos do presente trabalho foram: determinar a prevalencia de cada tipo de mutacao em 52 linhagens de H. pylori resistentes a cIaritromicina; e caracterizar a influencia de cada tipo de mutacao no OM e, descrever o mecanismo molecular de resistencia a tetraciclina em cinco amostras resistentes a este antibiotico.Alemdisso,desenvolverum metodorapidobaseado em PCR-RFLP para a deteccao de linhagens resistentes a tetraciclina. Tendo em vista que em cerca de 94% de nossas amostras a resistencia a claritromicina e mediada pelas mutacoes de ponto A2142-G e A2143-G, a metodologia empregada para a deteccao destas mostrou-se eficiente na identificacao de linhagens ClaR,Desse modo, sugerimos que, devido a sua rapidez e precisao, a deteccao de linhagens resistentes a claritromicinapor PCR-RFLP poderia ser utilizado rotineiramenteantes da escolha da terapia antimicrobiana. Os dados obtidos no presente trabalho confirmam que a substituicao AGA926-92T8T-C, presente nas cinco amostras estudadas, e responsavel por conferir a resistencia a tetraciclina. Alem disso, desenvolvemos uma metodologia capaz de detectar a presenca da substituicao AGA926-92T8T-C, responsavel por mediar a resistencia a tetraciclina em H. py/ori. O PCR-RFLP mostrou-se muito eficaz na identificacao de linhagens resistentes a tetraciclina. Desse modo, podemos concluir que essa metodologia permite uma rapida identificacao de linhagens resistentes a tetraciclina sem a necessidade da cultura bacteriana. Abstract