Papel de la vacuola parasitófora de macrófagos de ratón infectados por Leishmania amazonensis en la adquisición de moléculas

Introduccion. Leishmania son parasitos intracelulares de macrofagos, confinados encompartimentos denominados vacuolas parasitoforas. La permeabilidad de este compartimentodepende de su interaccion con el trafico vesicular y transportadores presentes en su membrana. Objetivo. En este trabajo se estudio la permeabilidad de la membrana de la vacuola parasitoforaen la linea celular J774.A1 infectada con Leishmania amazonensis, in situ y en compartimentosaislados. Materiales y metodos. El aislamiento de vacuolas parasitoforas se hizo por gradiente dedensidad. La permeabilidad de la membrana de estas se valoro por distribucion de sondasfluorescentes y electrofisiologia. Para establecer indirectamente el transporte de protones seuso naranja de acridina. La presencia de transportadores ABC sensibles a probenecid seestablecio con amarillo lucifer y calceina. Por primera vez con la tecnica de patch-clamp seregistraron corrientes en la membrana de este compartimento aislado. Resultados. La vacuola parasitofora colorea de rojo con naranja de acridina indicando un pHacido. Concentra amarillo lucifer a traves de un transportador sensible a probenecid, peroexcluye la sonda calceina. Vacuolas aisladas se marcan de rojo con naranja de acridina yconcentran amarillo lucifer a traves de un transportador sensible a probenecid. Estas vacuolasexcluyeron calceina y presentaron en su membrana una corriente ionica que se activa adiferencias de potencial cercanas a 60 mV, con una conductancia de 46 ± 3 pS. Conclusiones. Se pueden aislar vacuolas parasitoforas con propiedades de permeabilidadque preservan mecanismos de transporte similares a los encontrados in situ. Se registra porprimera vez la presencia de una corriente ionica poco selectiva en la membrana de estecompartimiento.