Détermination de la testostérone biodisponible chez la femme adulte par chromatographie en phase gazeuse–spectrométrie de masse avec dilution isotopique (ID-GCMS). Comparaison avec la méthode de routine à la testostérone tritiée

Resume La determination des androgenes est particulierement problematique chez les femmes etant donne les basses concentrations de testosterone totale (T tot) et de testosterone biodisponible (T Bio) respectivement 10 et 100 fois plus faibles que chez les hommes. De plus, les femmes sous estrogenes par voie orale ont des taux de T tot augmentes en raison de l'accroissement de la sex hormone binding globuline (SHBG) alors qu'en fait, la fraction libre ou biodisponible de la testosterone est diminuee. Ce qui en fait le parametre de choix a mesurer puisque seule la testosterone non liee a la SHBG (T libre + T liee a l'albumine) diffuse facilement de la circulation pour etre captee au niveau tissulaire et agir sur les cellules cibles. La technique directe RIA avec traceur analogue n'est pas recommandable, les determinations dans la salive donnent des resultats tres variables et la mesure de la Free T dans le dialysat n'est pas commercialisee et reste longue et delicate. L'objectif du travail est d'evaluer une technique sensible pour doser la T tot et la T Bio en faibles concentrations dans le syndrome d'insuffisance en androgenes (autre que la menopause) avec des taux d'androgenes a (ou sous) la limite inferieure du quartile le plus bas des femmes en âge de reproduction (20–40 ans) en presence de signes cliniques et d'un statut adequat en estrogenes. La technique la plus specifique en analyse des steroides, a savoir la chromatographie en phase gazeuse couplee a la spectrometrie de masse avec dilution isotopique (ID-GCMS) n'a pas ete utilisee pour valider les methodes de determination de la T Bio. Pour ce faire, nous comparons deux techniques de determination experimentale (indirecte et directe) de la testosterone biodisponible (T Bio) : 1) la methode indirecte en mesurant le pourcentage de steroide non lie a la SHBG apres equilibrage a 37 °C du serum mis en presence d'une dose de testosterone marquee au tritium [ 3 H]T recemment purifiee et precipitation par une solution saturee de sulfate d'ammonium (finale : 50 % saturation) ; pour obtenir la concentration de T Bio : T Bio 3 H E170 (III) ou T Bio 3 H MS (IV), on a multiplie ce pourcentage par la T tot : T tot E170 (I) ou T tot MS (II) determinee respectivement par la methode ECLIA sur Modular E-170 Roche et par ID-GCMS ; 2) la mesure directe par ID-GCMS de la concentration en T Bio MS (V) dans le surnageant apres la precipitation au sulfate d'ammonium de ce qui est lie a la SHBG. La sensibilite de la technique ID-GCMS pour un rapport signal/bruit de 3:1 est de 2 pg injectes de testosterone derivee. Pour les methodes ID-GCMS II et V respectivement, les taux moyens de recuperation sont de 82 et 92 %, les coefficients de variation (CV) intraessais sont de 3,9 % (126 pg/ml) et 6,2 % (13,8 pg/ml), les CV interessais sont de 4,3 % (126 pg/ml) et 17,3 % (15,4 pg/ml). Pour les methodes T Bio 3 H III et IV, les CV intra- et interessais sont de 4,5 % (2,8 pg/ml) et 3,7 % (58,4 pg/ml). Les resultats des dosages realises en simple par les differentes techniques demontrent des correlations hautement significatives ( p r  = 0,88) et entre techniques indirectes (III ou IV) et directe (V) pour la T Bio : III versus V ( r  = 0,85) et IV versus V ( r  = 0,90). Ceci demontre la validite analytique de la methode d'approche indirecte si on considere la technique directe par ID-GCMS comme procedure de reference. La methode T tot E170 (I) a des performances acceptables (CV interessais = 20 % a 120 pg/ml) pour la routine mais la methode T tot MS (II) est indispensable pour les valeurs basses (CV interessais = 4,3 % a 126 pg/ml) ou si un maximum de fiabilite est requis. La validite des resultats de T Bio 3 H depend de la validite des resultats de T tot sur la base desquels ils sont calcules. En depit de cette limitation et si on souhaite ne pas depasser une imprecision (CV) intra- de 5 % et interessais de 10 % a (ou sous) la limite inferieure du quartile le plus bas (T Bio  3 H (III et IV) sont a retenir en depit de la sensibilite elevee mais insuffisante de la methode directe (V) par ID-GCMS.