Développement d’une technique de PCR quantitative en temps réel dans le diagnostic de la toxoplasmose chez des patients greffés de moelle osseuse

Resume But de l’etude Des techniques de detection sensibles, rapides et specifiques sont indispensables au diagnostic de la toxoplasmose chez les patients immunodeprimes ou en cas d’atteinte fœtale. Les objectifs de ce travail etaient de mettre au point une technique de diagnostic moleculaire appliquee a Toxoplasma gondii par PCR en temps reel avec controle interne competitif et, par ailleurs, d’evaluer la frequence des reactivations toxoplasmiques dans une population de patients allogreffes. Patients et methodes Des amorces et une sonde Taqman specifiques de la sequence repetee de 529 pb ont ete selectionnees. Un controle interne d’amplification a ete construit par clonage d’un fragment d’ Arabidopsis thaliana . Une deuxieme sonde Taqman, specifique du controle interne, a ete choisie et testee. La repetabilite et la reproductibilite de notre technique ont ete evaluees. Une etude a alors ete realisee sur des patients allogreffes de moelle osseuse du service d’hematologie clinique de l’Hotel-Dieu de Clermont-Ferrand. Des prelevements de sang total ont ete analyses de facon hebdomadaire puis bimensuelle (a partir de j100) pendant les six premiers mois postgreffe. Resultats Sur une periode de 12 mois, 451 echantillons provenant de 40 patients ont ete testes. Sur ces 40 patients, 25 avaient a la fois une serologie toxoplasmose positive et une chimioprophylaxie antitoxoplasmique adequate. Un prelevement issu d’un de ces 25 patients etait positif, ce qui porte le taux de reactivation dans cette population a risque a 4 %. Conclusion Un suivi hebdomadaire systematique par PCR Toxoplasma gondii de tous les patients allogreffes semble excessif, mais est indispensable chez les patients ne pouvant pas recevoir de prophylaxie adequate.