全人源药用抗EGFR ScFv(HL-L-L)的构建、表达及抗肿瘤活性分析

目的对抗EGFR单克隆抗体重链可变区(VH)和轻链全长(L)经柔性肽链(linker)连接而成的单链抗体(VH-L-L)进行构建、表达及其抗肿瘤活性的分析,并对其进行生物信息学分析和相关谱学表征。方法通过OVER LAPING技术得到EGFR ScFv(HL-L-L)基因,然后构建原核表达载体pET-28a-c(+)-VH-L-L,经诱导表达、Ni柱纯化后得到目的蛋白HL-L-L,并对其利用SWISSMODEL进行三级结构预测;通过紫外扫描分光光度计,进行吸收波长的扫描;用NanoZSP表征目的蛋白VH-L-L的粒度和电位;随后利用药理学方法,研究HL-L-L对乳腺癌细胞的增殖抑制情况。结果成功构建了原核表达载体pET-28a-c(+)-VH-L-L;获得了较高纯度的VH-L-L蛋白,并成功预测了其三维结构;其粒度约为489.7 nm,Zeta电势为-38.1,带负电;HL-L-L对MCF-7具有一定的增殖抑制作用,与空白组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论成功表达了全人源药用抗EGFR ScFv(HL-L-L),其对乳腺癌细胞的增殖抑制作用显著,为下一步研制抗EGFR的小分子抗体药物提供基础。