大鼠电子传递黄素蛋白-泛醌氧化还原酶cDNA的克隆、功能表达和细胞定位

从大鼠肝线粒体纯化得到一个内膜结合蛋白, 经蛋白酶水解发现丰度最高的两个肽段含有相同的一个14肽序列. BLAST同源搜索找到了与这个14肽对应的大鼠基因组DNA. 利用RACE的方法得到一个完整开放阅读框的cDNA, 编码含616个氨基酸残基的蛋白质序列. 克隆得到的大鼠cDNA与人的 ETF-QO 具有很高的同源性. 通过序列比较发现克隆得到的cDNA对应大鼠ETF-QO的蛋白前体ETF-QOp, 而从大鼠肝线粒体纯化得到的内膜结合蛋白则是ETF-QO. 构建的pYES/ETF-QO在酵母中的表达产物富集于线粒体组分, 并具有ETF-QO的氧化-还原活性, 因此获得了ETF-QO在酵母中的功能表达, 表明ETF-QOp N端32肽是线粒体的引导肽, 且FAD及[4Fe-4S]被正确地组装. ETF-QO在大鼠的心、肝、肾表达较高, 而在脾与肺却很低. 在动物细胞中表达了ETF-QOp的GFP融合蛋白, 它在细胞内与线粒体的特异染料呈共定位.