当归拈痛汤调控Fas/caspase-8通路促进类风湿关节炎滑膜成纤维细胞凋亡

目的探究当归拈痛汤（DGNTD）对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞（FLS）凋亡及TNF受体超族成员6（Fas）/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-8（caspase-8）通路的影响。 方法收集临床RA患者的滑膜组织，无菌条件下采用酶解法分离并培养出FLS细胞。采用免疫荧光染色法对细胞进行鉴定。FLS细胞分为空白组（NC组）、DGNTD低剂量组、DGNTD中剂量组、DGNTD高剂量组、Fas抑制剂联合DGNTD组（KR-33493+DGNTD组）。NC组：10%空白血清干预FLS细胞；DGNTD低剂量组：10% DGNTD低剂量含药血清干预FLS细胞；DGNTD中剂量组：10% DGNTD中剂量含药血清干预FLS细胞；DGNTD高剂量组：10% DGNTD高剂量含药血清干预FLS细胞；KR-33493+DGNTD组：20 μmol/mL KR-33493+10% DGNTD高剂量含药血清干预FLS细胞。通过MTT法检测不同剂量DGNTD对FLS细胞增殖的影响；Hoechst 33342法和Annexin V-FITC/PI流式细胞术分别检测FLS细胞凋亡特性和凋亡率；qPCR和Western blot分别检测FLS细胞Fas、Fas相关蛋白（FADD）、caspase-8、caspase-3的mRNA和蛋白表达量。 结果免疫荧光实验证明本实验提取出的细胞为FLS细胞；MTT结果显示DGNTD含药血清随着剂量和干预时间的增加可显著抑制FLS的增殖（P＜0.05）；Hoechst33342和流式细胞术结果显示不同剂量的DGNTD含药血清可以显著促进FLS细胞凋亡（P＜0.05）；qPCR和Western blot均显示不同剂量的DGNTD含药血清可以显著提高Fas、FADD、caspase-8、caspase-3 mRNA和蛋白的表达水平（P＜0.05）；进一步发现，Fas蛋白抑制剂（KR-33493）可以逆转DGNTD对FLS细胞的上述作用（P＜0.05）。 结论当归拈痛汤可能通过激活Fas/caspase-8通路来诱导FLS细胞凋亡。