Isolation and purification of the immunodominant antigen P61 from Nocardia brasiliensis culture filtrate

Objectifs. L'objet de cette etude a ete de comparer la purete de la catalase P61, obtenue a partir de deux sources : filtrat de culture et cellules bacteriennes. Materiel et Methodes. Des cultures de N. brasiliensis ATCC-7000358 ont ete utilisees pour isoler la proteine P61. Le filtrat de culture a ete additionne avec 50 % de sulfate d'ammonium a 4 °C. Apres centrifugation, le precipite a ete largement dialyse et lyophilise. Apres electrophorese des proteines en gel de polyacrylamide a 12 % en presence de SDS. la P61 a ete finalement purifiee par elution de la bande correspondante. La purete de P61 a ete analysee en gradient 8-18 % de SDS PAGE. Resultats. La fraction P61 isolee du filtrat de culture est plus pure que celle obtenue a partir des cellules, mais sa concentration est inferieure. Nous avons confirme l'activite catalasique de la proteine purifiee et avons suivi la cinetique de son apparition dans le milieu de culture. Conclusion. L'antigene immunodominant P61 de N.brasiliensis est present dans le filtrat de culture et peut etre purifie avec un meilleur rendement. Il possede une activite catalasique elevee.