Les lipases sels biliaires-dépendantes : comparaison des lipases sels biliaires-dépendantes des sécrétions pancréatiques et mammaires humaines

Dans ce travail, nous avons montre que toutes les activites esterasiques du suc pancreatique, specifiquement activees par les sels biliaires, sont portees par la meme proteine: la lipase sels biliaires-dependante (bsdl). Cette enzyme, purifiee chez plusieurs especes presente des compositions en acides amines et des sequences n-terminales comparables. La variation du poids moleculaire de cette enzyme d'une espece a l'autre est due a un taux de glycosylation different. Nous nous sommes aussi interesses a l'etude du centre catalytique de la bsdl du lait humain, nous avons montre que le mecanisme reactionnel de cette enzyme fait intervenir un residu acylable (serine), un residu d'histidine et un carboxylate comme partenaires du centre catalytique. L'etude de l'inhibition competitive de la bsdl du lait par les derives boroniques montre qu'un intermediaire tetraedrique est implique durant la catalyse enzymatique et que le taurocholate de sodium agirait en stabilisant cet intermediaire tetraedrique. Les derives de l'acide boronique n'interferent ni avec les regions de l'enzyme impliquees dans la reconnaissance de l'interface, ni avec les sites de fixation des sels biliaires. L'etude de l'inhibition de l'enzyme par les carbamates montre que la catalyse enzymatique se deroule selon un mecanisme acyl-enzyme classique. Cette etude a permis la synthese d'un compose, le p-nitrophenyl-n-methyl-n-butyl carbamate, compose titrateur specifique du centre actif des bsdl. Ensuite, nous avons montre, par fractionnement subcellulaire et par immunolocalisation que l'activite cholesterol esterase responsable de l'esterification intraenterocytaire du cholesterol chez l'homme possede des proprietes identiques a celles de la bsdl du pancreas. Cette enzyme a ete localisee au niveau des vesicules d'endocytoses, de la lamina propria et de la sous-muqueuse montrant le transfert intraenterocytaire de cette proteine qui p