罗尼氏弧菌Vibrio shilonii BY新琼胶酶基因的克隆、序列分析及表达

【目的】从海洋来源的罗尼氏弧菌菌株BY中克隆得到一个具有琼胶酶活性的新基因,并对其进行重组表达。【方法】对实验室保藏的产琼胶酶菌株BY进行16S r RNA基因序列分析,并构建系统发育树。根据已报道的琼胶酶基因序列的同源性,设计简并引物,利用降落PCR（Touch-down PCR）及染色体步移技术扩增琼胶酶基因序列全长,对基因序列进行生物信息学分析。将目的基因插入p ET22a（＋）载体,转化大肠杆菌BL21（DE3）,对重组酶进行表达,利用DNS法测定了重组酶的酶活,对该重组琼胶酶酶学性质进行研究。【结果】克隆得到一条新的琼胶酶基因,命名为Vibrio sp.BY（Gen Bank登录号：AIW39921.1）,Vibrio sp.BY基因序列全长2 232 bp,编码744个氨基酸,理论分子量为85 k D,Vibrio sp.BY的氨基酸序列基因库中与已知的琼胶酶氨基酸序列Vibrio sp.EJY3的相似度为86%。发酵液琼胶酶酶活力为71.73 U/m L,证明表达的蛋白为琼胶酶。酶学性质研究表明重组琼胶酶的最适温度及p H分别为50°C和7.0,并且具有较好的稳定性。【结论】利用染色体步移技术克隆得到一条新的琼胶酶基因,并在大肠杆菌BL21（DE3）中实现了重组表达,为琼胶酶的应用奠定了基础。