pMSCVpuro-BIG-3诱导人骨髓基质干细胞向成骨方向分化的实验研究

目的制备重组BIG-3（BMP-2 induced gene 3 Kb，BIG-3）逆转录病毒并初步探讨其对人骨髓基质细胞生物学功能的影响。方法 将pGEX4T-2-BIG-3和pMSCVpuro双酶切，回收凝胶，行连接反应，连接产物转化DH50 α感受态细胞，提取质粒，采用菌液PCR方法鉴定所提质粒，以此质粒转染PT67细胞制备重组BIG-3逆转录病毒并用PCR法鉴定；培养人骨髓基质细胞，待其达60％汇合时加入含重组BIG-3逆转录病毒的细胞培养上清，嘌罗霉素筛选，筛选持续10d后所得细胞行碱性磷酸酶染色和钙结节染色。结果重组质粒pMSCVpuro—BIG-3的菌液PCR法和重组BIG-3逆转录病毒的PCR法电泳图片均在1Kb处有清晰的单一条带，符合预期目的，碱性磷酸酶染色和钙结节染色均呈强阳性。结论 成功制备BIG-3逆转录病毒，BIG-3可使人骨髓基质细胞向成骨细胞方向分化。