K562细胞 TMS1基因去甲基化后NF-κB 表达的变化

目的：探讨甲基化诱导静止基因（ TMS1）在慢性髓性白血病细胞系K562细胞中的甲基化程度及其与NF-κB的关系。方法选取6例正常人及非恶性血液病患者骨髓细胞作为骨髓细胞对照组，提取RNA，采用逆转录聚合酶链反应（ RT-PCR）检测TMS1 mRNA表达；体外培养K562细胞，设空白对照组、0．5μmol/L地西他滨（ DCA）实验组、1μmol/L DCA实验组。采用甲基化特异性聚合酶链反应（ MS-PCR）检测各组K562细胞TMS1基因甲基化程度；采用RT-PCR和Western blotting法检测各组K562细胞TMS1基因与NF-κB在mRNA及蛋白水平的表达变化；采用CCK-8法检测细胞增殖抑制作用，光学显微镜下观察细胞形态变化。结果骨髓细胞对照组均可检测到TMS1 mRNA的表达，而 K562细胞系中无 TMS1 mRNA 表达。 MSP检测结果显示，空白对照组TMS1基因呈完全甲基化；TMS1基因去甲基化后 NF-κB 的表达下调，与空白对照组相比，其他两组细胞TMS1mRNA及蛋白表达均增高，而NF-κB表达均降低，差异有统计学意义（P＜0．05）。不同浓度的DCA对K562细胞均有一定的增殖抑制作用，且呈量效和时效关系。结论 TMS1基因在K562细胞中呈完全甲基化，其沉默表达可能会异常激活NF-κB途径，部分参与白血病的发生发展。