HSV-1 UL30基因cDNA的克隆及筛选有效siRNA的融合载体构建

目的：克隆HSV-1 UL30 cDNA并测序，构建pEGFP-N1-Fi融合表达载体，为靶向UL30基因的siRNA的设计和筛选奠定基础。方法：从感染HSV-1 F株的病变VERO细胞提取总RNA，二次PCR扩增出UL30cDNA并克隆至pEGFP-N1质粒，测序鉴定序列；将UL30cDNA4个小片段亚克隆至pEGFP-N1-Fi融合表达质粒，转染VERO细胞，荧光显微镜观察融合蛋白表达情况。结果：成功克隆出UL30 cDNA，序列对比显示与基因库中的HSV-1株UL30序列同源性为99.4%；成功构建pEGFP-N1-Fi融合表达载体并实现Fi-EGFP融合蛋白的表达。结论：成功克隆出UL30cDNA，成功构建pEGFP-N1-Fi融合表达载体，为靶向UL30基因的siRNA的设计和筛选奠定基础。